[发明专利]乳粉中大肠菌群标准样品及其制备方法

权利要求书

1.乳粉中大肠菌群标准样品，其特征是：包括目标菌群与背景菌群，所述目标菌群由大肠埃希氏菌、肺炎克雷伯菌、阴沟肠杆菌、产气肠杆菌组成，所述背景菌群由金黄色葡萄球菌、蜡样芽胞杆菌、马红球菌组成；所述样品以海藻糖、脱脂奶粉和无菌水为基质，其中海藻糖体积分数为10％、脱脂奶粉体积分数为15%；所述样品中目标菌群的目标浓度为10²～10³CFU/mL，背景菌群的目标浓度为10³ CFU/mL；

所述标准样品的制备方法，具体过程为：

（1）菌株复苏传代

将所述目标菌群与背景菌群所包括各菌的标准菌株接种到营养琼脂斜面培养基中，在36±1℃下使其复苏和生长，并对复苏的菌株进行鉴定；

（2）增菌

目标菌群培养至对数生长期末，背景菌群培养至稳定期，从斜面刮取菌落，加到10mL的冻干保护剂中制成相应单一菌种的菌液；

（3）菌悬液配制

将上一过程得到的菌液与冻干保护剂混合，按目标菌群的目标浓度10²～10³ CFU/mL和背景菌群的目标浓度10³CFU/mL配制菌悬液，配制4个目标菌的菌悬液，按1:1体积比混合形成目标菌群悬液，配置3个背景菌的菌悬液，按1:1体积比混合形成背景菌群悬液，再将目标菌群悬液与背景菌群悬液按1:1体积比混合，得到混合菌悬液，置于磁力搅拌器上不断搅拌下分装到样品瓶中，加上瓶塞，但要留有空隙，不要盖实；

（4）冻干和包装

将装有混合菌悬液的样品瓶开盖放入冻干机中，冷冻干燥40～50h，当样品冷冻干燥结束后，直接进行箱内加塞，关闭机器，样品瓶中样品为真空状态；

冷冻干燥机参数按如下设置：

冷冻速度0.5℃/min

早期冷冻点-1℃ 15min

冷冻温度-40℃

共熔点-29℃

加热温度20℃ 120min

启动冷冻干燥机，机器直接进入程序化的冷冻干燥过程，整个冻干过程40h；

（5）储存

将样品放置在-18℃条件下避光保存，从全部样品中随机挑选样品发放给实验室或进行均匀性和稳定性试验，检查样品均匀性和稳定性按照 GB/T 15000.3-2008《标准样品工作导则（3） 标准样品 定值的一般原则和统计方法》进行。

2.根据权利要求1所述的乳粉中大肠菌群标准样品的制备方法，其特征是：具体过程为：

（1）菌株复苏传代

将所述目标菌群与背景菌群所包括各菌的标准菌株接种到营养琼脂斜面培养基中，在36±1℃下使其复苏和生长，并对复苏的菌株进行鉴定；

（2）增菌

目标菌群培养至对数生长期末，背景菌群培养至稳定期，从斜面刮取菌落，加到10mL的冻干保护剂中制成相应单一菌种的菌液；

（3）菌悬液配制

将上一过程得到的菌液与冻干保护剂混合，按目标菌群的目标浓度10²～10³ CFU/mL和背景菌群的目标浓度10³CFU/mL配制菌悬液，分别配制4个目标菌的菌悬液，按1:1体积比混合形成目标菌群悬液，配置3个背景菌的菌悬液，按1:1体积比混合形成背景菌群悬液，再将目标菌群悬液与背景菌群悬液按1:1体积比混合，得到混合菌悬液，置于磁力搅拌器上不断搅拌下分装到样品瓶中，加上瓶塞，但要留有空隙，不要盖实；

（4）冻干和包装

将装有混合菌悬液的样品瓶开盖放入冻干机中，冷冻干燥40～50h，当样品冷冻干燥结束后，直接进行箱内加塞，关闭机器，样品瓶中样品为真空状态；

冷冻干燥机参数按如下设置：

冷冻速度0.5℃/min

早期冷冻点-1℃ 15min

冷冻温度-40℃

共熔点-29℃

加热温度20℃ 120min

启动冷冻干燥机，机器直接进入程序化的冷冻干燥过程，整个冻干过程40h；

（5）储存

将样品放置在-18℃条件下避光保存，从全部样品中随机挑选样品发放给实验室或进行均匀性和稳定性试验。