[发明专利]一种表达溶葡球菌素基因的重组乳酸乳球菌的构建方法及应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种表达溶葡球菌素基因的重组乳酸乳球菌的构建方法及应用。

背景技术

溶葡球菌素是一种对葡萄球菌溶菌作用的抗菌酶，具有水解葡萄球菌细胞壁肽聚糖 gly 五肽桥联的催化活性，近年来葡萄球菌尤其是金黄色葡萄球菌的耐药状况日益严重，溶葡球菌素的药用潜力更加受到人们重视，同时葡萄球菌病给畜禽养殖业的发展造成巨大危害，因此应用溶葡球菌素预防和治疗畜禽葡萄球菌病具有广阔的应用前景。

乳酸乳球菌做为一种益生菌，对机体的健康十分重要，它能产生多种代谢酶类和维生素，促进畜禽消化，抑制有害菌繁殖并改变肠道内环境，进而促进肠道健康，提高畜禽生产性能。

发明内容

本发明其目的就在于提供一种表达溶葡球菌素基因的重组乳酸乳球菌的构建方法及应用，本发明既可发挥乳酸乳球菌的益生菌功效，又可发挥猪溶葡球菌素杀灭肠道内葡萄球菌，预防和治疗葡萄球菌病的功效。

为实现上述目的而采取的技术方案是，

一种表达溶葡球菌素基因的重组乳酸乳球菌，重组乳酸乳球菌为Lysostaphin-pNZ8148-NZ9000。

一种表达溶葡球菌素基因的重组乳酸乳球菌的构建方法，包括以下步骤：

（1）按照宿主菌乳酸乳球菌的密码子偏好性进行优化而合成溶葡球菌素 （Lysostaphin ）基因与乳酸乳球菌（ pNZ8148）质粒；

（2）用限制性内切酶分别对溶葡球菌素 （Lysostaphin ）基因与乳酸乳球菌（ pNZ8148）质粒进行双酶切，回收，再经 T4 DNA 连接酶进行连接后转化至大肠杆菌 MC1061 感受态细胞中；

（3）使用氯霉素抗性进行筛选后，提取重组质粒并电转至乳酸乳球菌NZ9000中，PCR 鉴定正确，得到重组乳酸乳酸球菌 Lysostaphin-pNZ8148-NZ9000；

（4）Western Blot鉴定重组乳酸乳球菌的表达结果。

一种表达溶葡球菌素基因的重组乳酸乳球菌的应用，所述的重组乳酸乳球菌Lysostaphin-pNZ8148-NZ9000全培养基可直接饲喂动物，既可发挥乳酸乳球菌的益生菌功效，又可发挥猪溶葡球菌素杀灭肠道内葡萄球菌，预防和治疗葡萄球菌病的功效。

有益效果

与现有技术相比本发明具有以下优点。

本发明公开的优点是，可经诱导产生溶葡球菌素，该重组菌全培养基直接饲喂动物，既可发挥乳酸乳球菌的益生菌功效，又可发挥猪溶葡球菌素杀灭肠道内葡萄球菌，预防和治疗葡萄球菌病的功效。

附图说明

以下结合附图对本发明作进一步详述。

图1为筛选溶葡球菌素基因与 pNZ8148 质粒连接的阳性克隆子电泳图（引物Lysostaphin-F 和 Lysostaphin-R，产物约768bp）；

图2为乳酸乳球菌 NZ9000 表达 Lysostaphin 蛋白的western blot图（蛋白大小在 27KD 左右）；

图3为 pNZ8148 质粒图谱。

具体实施方式

一种表达溶葡球菌素基因的重组乳酸乳球菌，重组乳酸乳球菌为Lysostaphin-pNZ8148-NZ9000。

所述的质粒为pNZ8148。

一种表达溶葡球菌素基因的重组乳酸乳球菌的构建方法，如图1-3所示，包括以下步骤：

（1）按照宿主菌乳酸乳球菌的密码子偏好性进行优化而合成溶葡球菌素 （Lysostaphin ）基因与乳酸乳球菌（ pNZ8148）质粒；

（2）用限制性内切酶分别对溶葡球菌素 （Lysostaphin ）基因与乳酸乳球菌（ pNZ8148）质粒进行双酶切，回收，再经 T4 DNA 连接酶进行连接后转化至大肠杆菌 MC1061 感受态细胞中；

（3）使用氯霉素抗性进行筛选后，提取重组质粒并电转至乳酸乳球菌NZ9000中，PCR 鉴定正确，得到重组乳酸乳酸球菌 Lysostaphin-pNZ8148-NZ9000；

（4）Western Blot鉴定重组乳酸乳球菌的表达结果。

一种表达溶葡球菌素基因的重组乳酸乳球菌的应用，所述的重组

乳酸乳球菌Lysostaphin-pNZ8148-NZ9000全培养基可直接饲喂动物，既可发挥乳酸乳球菌的益生菌功效，又可发挥猪溶葡球菌素杀灭肠道内葡萄球菌，预防和治疗葡萄球菌病的功效。

实施例 1

目的基因的合成