[发明专利]一种表达猪溶菌酶基因的乳酸克鲁维酵母及表达方法在审
| 申请号： | 201710467701.X | 申请日： | 2017-06-20 |
| 公开（公告）号： | CN107236681A | 公开（公告）日： | 2017-10-10 |
| 发明（设计）人： | 曹远东;汪石粮;周志;曾二生;程晓文;向勇 | 申请（专利权）人： | 江西嘉博生物工程有限公司 |
| 主分类号： | C12N1/19 | 分类号： | C12N1/19;C12N15/81;C12R1/645 |
| 代理公司： | 南昌新天下专利商标代理有限公司36115 | 代理人： | 谢德珍 |
| 地址： | 332600 江西省九江*** | 国省代码： | 江西;36 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 表达 猪溶菌酶 基因 乳酸 克鲁 酵母 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种表达猪溶菌酶基因的乳酸克鲁维酵母，其特征在于，所述乳酸克鲁维酵母为GG779。
2.根据权利要求1所述的一种表达猪溶菌酶基因的乳酸克鲁维酵母，其特征在于，包含权利要求1所述猪溶菌酶基基因的质粒，所述质粒为乳酸克鲁维酵母质粒pKLAC2。
3.根据权利要求1所述的一种表达猪溶菌酶基因的乳酸克鲁维酵母，其特征在于，所述猪溶菌酶基因是按乳酸克鲁维酵母密码子偏好性优化并合成的。
4.根据权利要求1所述的一种表达猪溶菌酶基因的乳酸克鲁维酵母的表达方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）以乳酸克鲁维酵母密码子偏好性优化并合成猪溶菌酶基因，基因两端同时引入NcoI 与EcoRI两个限制性内切酶位点；
（2）使用NcoI 与EcoRI同时对该基因与乳酸克鲁维酵母质粒pKLAC2进行双酶切；
（3）回收酶切产物，4℃连接过夜，转化到大肠杆菌JM109感受态细胞中；
（4）PCR扩增鉴定疑似阳性转化子并测序，同时提取疑似阳性转化子的质粒进行双酶切鉴定，得到正确的重组质粒；
（5）提取重组质粒lys- pKLAC2并使用SacII酶切线性化，线性化的重组质粒转化乳酸克鲁维酵母GG779,经PCR扩增鉴定，获得重组乳酸克鲁维酵母lys- pKLAC2-GG779。
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