[发明专利]一种葛仙米藻胆蛋白的提取、纯化方法及纯化的藻红蛋白

权利要求书

1.一种葛仙米藻红蛋白的纯化方法，其特征在于，包括步骤：(1)选用阴离子交换柱过柱；(2)配置PB缓冲液BufferA和PB-NaCl缓冲液Buffer B；(3)葛仙米藻胆蛋白粗提粉末用PB缓冲液BufferA溶解，离心，过滤；(4)洗泵，用PB缓冲液BufferA平衡离子交换柱；(5)将步骤(3)制备的溶解于PB缓冲液BufferA中的葛仙米藻胆蛋白直接上样，PB-NaCl缓冲液Buffer B梯度洗脱，收集洗脱液；(6)用盐溶液清洗离子交换柱，然后用碱溶液反向冲洗；(7)对步骤(5)的洗脱液进行超滤浓缩，透析，得到纯化的葛仙米藻红蛋白水溶液；其中，PB缓冲液BufferA的pH为5～6.5；PB-NaCl缓冲液Buffer B的pH为5～6.5。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)中，PB缓冲液BufferA的电导率为5～10μs/cm；PB-NaCl缓冲液Buffer B的电导率为5～10μs/cm。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)中，所述BufferA缓冲液和Buffer B缓冲液的pH为6～6.5，电导率为6～8μs/cm。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)中，所述PB缓冲液pH为5，电导率为8.5μs/cm时，PB-NaCl缓冲液pH为5，电导率为8.5μs/cm；或，PB缓冲液pH为6，电导率为8.0μs/cm时，PB-NaCl缓冲液pH为6，电导率为8.0μs/cm；或，PB缓冲液pH为6.3，电导率为7.1μs/cm时，PB-NaCl缓冲液pH为6.3，电导率为7.1μs/cm；或，PB缓冲液pH为6.5，电导率为6.0μs/cm时，PB-NaCl缓冲液pH为6.5，电导率为6.0μs/cm。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述阴离子交换柱为Agarosix FF-DEAE阴离子交换柱。

6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述阴离子交换柱的介质为粒径为50～150μm，交联度为6％的琼脂糖凝胶。

7.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(1)过柱前先用去离子水置换离子交换柱介质中的20％的乙醇水。

8.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)中，所述葛仙米藻胆蛋白粗提粉末、PB缓冲液的用量比5g:1L～15g:1L。

9.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(4)中，所述超滤膜孔径为1000D～8000D。

10.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(6)中，所述NaCl或KCl的浓度为0.02～0.1M；所述NaOH或KOH的浓度为0.1～0.5M。

11.一种由权利要求1～10之任一项所述方法得到的葛仙米藻红蛋白。

12.一种葛仙米藻胆蛋白的提取方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：(a)将葛仙米干粉加入水中；(b)加入液氮，搅拌，待液氮挥发完全；(c)离心过滤，得到葛仙米藻胆蛋白提取液；(d)冷冻干燥得到葛仙米藻胆蛋白粗提粉末。