[发明专利]一种治疗急性传染性肝炎的中药制剂的检测方法

权利要求书

1.一种治疗急性传染性肝炎的中药制剂的检测方法，该中药制剂是以茵陈240重量份、丹参240重量份、柴胡120重量份、白茅根120重量份、板蓝根120重量份、甘草120重量份、大枣60重量份为原料药制成的，其特征在于，该检测方法包括：

（1）茵陈和青蒿的成分鉴别：分别以滨蒿内酯、青蒿素为对照品，用硅胶G薄层板，以体积比计的60～90℃石油醚∶乙酸乙酯∶丙酮=5～9∶3～5∶1～3为展开剂，用薄层色谱法鉴别；

（2）丹参和秦艽的成分鉴别：分别以丹参酮ⅡA、龙胆苦苷为对照品，用硅胶G薄层板，以体积比计的苯∶乙酸乙酯=19～23∶0.5～2为展开剂，用薄层色谱法鉴别；

（3）甘草的成分鉴别：以甘草为对照药材，用硅胶G薄层板，以体积比计的三氯甲烷∶甲醇∶水=38～42∶8～12∶0.5～2为展开剂，用薄层色谱法鉴别；

（4）丹参酮ⅡA的含量测定：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积比计的甲醇∶水=72～78∶23～27为流动相；检测波长为260～280nm；理论板数按丹参酮ⅡA峰计算应不低于2000；精密称取丹参酮ⅡA对照品10mg，置50ml棕色量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀；精密量取2ml，置25ml棕色量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得对照品溶液；取本品2g，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，称定重量，在功率120W，频率59KHz的条件下超声处理10～30分钟，放冷，密塞，再称定重量，用甲醇补足减失重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液；分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

2.根据权利要求1所述的治疗急性传染性肝炎的中药制剂的检测方法，其特征在于：

（1）所述茵陈和青蒿的成分鉴别：取本品1g，加甲醇8～12ml，超声处理20～40分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液；取滨蒿内酯对照品，加甲醇制成每1ml含0.4mg的溶液，作为滨蒿内酯对照品溶液；取青蒿素对照品，加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液，作为青蒿素对照品溶液；吸取上述三种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以按体积比计的60～90℃石油醚：乙酸乙酯：丙酮=6～8：3.5～4.5：1.5～2.5为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm的紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与滨蒿内酯对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；在与青蒿素对照品色谱相应的位置上，不显相同颜色的斑点；

（2）所述丹参和秦艽的成分鉴别是：取本品2g，加水8～12ml，搅拌使溶解，加乙醚15～25ml，振摇，放置0.5～2小时，分取乙醚层，备用，残液再加乙醚8～12ml，振摇，放置0.5～2小时，分取乙醚层，与前面的乙醚混合，挥干，残渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作为供试品溶液；取丹参酮ⅡA对照品，加乙酸乙酯制成每1ml含0.3mg的溶液，作为丹参酮ⅡA对照品溶液；取龙胆苦苷对照品，加乙酸乙酯制成每1ml含0.2mg的溶液，作为龙胆苦苷对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各4μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以按体积比计的苯：乙酸乙酯=20～22：0.8～1.5为展开剂，展开，取出，晾干，供试品色谱中，在与丹参酮ⅡA对照品色谱相应位置上，显相同颜色的斑点；在与龙胆苦苷对照品色谱相应位置上，不显相同颜色的斑点；

（3）所述甘草的成分鉴别是：取本品10g，加乙醇20～40ml，搅拌使溶解，超声处理10～30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水10～30 ml溶解，用盐酸调pH值至2～3，用乙酸乙酯振摇提取1～3次，每次10～30 ml，合并乙酸乙酯提取液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取甘草对照药材1g，加水适量，煎煮30分钟，放冷，滤过，滤液浓缩至20ml，用水饱和的正丁醇振摇提取2 次，每次20ml，合并正丁醇提取液，用正丁醇饱和的水洗涤2次，每次10ml，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液及对照药材溶液各5～10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以按体积比计的三氯甲烷：甲醇：水=39～41：9～11：0.8～1.5为展开剂，展开，取出，晾干，喷以 5% 香草醛硫酸溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

（4）所述丹参酮ⅡA的含量测定是：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以按体积比计的甲醇：水=73～76∶24～26为流动相；检测波长为265～275nm；理论板数按丹参酮ⅡA峰计算应不低于2000；精密称取丹参酮ⅡA对照品10mg，置50ml棕色量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，然后再从摇匀的混合液中精密量取2ml，置25ml棕色量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得每1ml中含丹参酮ⅡA 16μg的对照品溶液；取本品2g，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，称定重量，在功率120W，频率59KHz的条件下超声处理15～25分钟，放冷，密塞，再称定重量，用甲醇补足减失重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液；分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

3.根据权利要求2所述的治疗急性传染性肝炎的中药制剂的检测方法，其特征在于：

（1）所述茵陈和青蒿的成分鉴别是：取本品1g，加甲醇10ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液；取滨蒿内酯对照品，加甲醇制成每1ml含0.4mg的溶液，作为滨蒿内酯对照品溶液；取青蒿素对照品，加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液，作为青蒿素对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比计的60～90℃石油醚∶乙酸乙酯∶丙酮=7∶4∶2为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与滨蒿内酯对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，在与青蒿素对照品色谱相应的位置上，不显相同颜色的斑点；

（2）所述丹参和秦艽的成分鉴别是：取本品2g，加水10ml，搅拌使溶解，加乙醚20ml，振摇，放置1小时，分取乙醚层，备用，残液再加乙醚10ml，振摇，放置1小时，分取乙醚层，与前面的乙醚混合，挥干，残渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作为供试品溶液；取丹参酮ⅡA对照品，加乙酸乙酯制成每1ml含0.3mg的溶液，作为丹参酮ⅡA对照品溶液，取龙胆苦苷对照品，加乙酸乙酯制成每1ml含0.2mg的溶液，作为龙胆苦苷对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各4μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比计的苯∶乙酸乙酯=21∶1为展开剂，展开，取出，晾干，供试品色谱中，在与丹参酮ⅡA对照品色谱相应位置上，显相同颜色的斑点，在与龙胆苦苷对照品色谱相应位置上，不显相同颜色的斑点；

（3）所述甘草的成分鉴别是：取本品10g，加乙醇30ml，搅拌使溶解，超声处理20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水20 ml溶解，用盐酸调pH值至2～3，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次20ml，合并乙酸乙酯提取液，蒸干，残渣加甲醇1 ml使溶解，作为供试品溶液；另取甘草对照药材1g，加水适量，煎煮30分钟，放冷，滤过，滤液浓缩至20ml，用水饱和的正丁醇振摇提取2次，每次20ml，合并正丁醇提取液，用正丁醇饱和的水洗涤2次，每次10ml，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液及对照药材溶液各5～10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比计的三氯甲烷∶甲醇∶水=40∶10∶1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以 5% 香草醛硫酸溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

（4）所述丹参酮ⅡA的含量测定是：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积比计的甲醇∶水=75∶25为流动相；检测波长为270nm；理论板数按丹参酮ⅡA峰计算应不低于2000；精密称取丹参酮ⅡA对照品10mg，置50ml棕色量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀；精密量取2ml，置25ml棕色量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得对照品溶液；取本品2g，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，称定重量，在功率120W，频率59KHz的条件下超声处理20分钟，放冷，密塞，再称定重量，用甲醇补足减失重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液；分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5μl，注入液相色谱仪，测定，即得。