[发明专利]一种蛹虫草液体发酵菌种的培育方法和应用

说明书

技术领域

本发明涉及应用生物技术原理人工培育真菌的技术领域，具体涉及蛹虫草的培育，更具体地涉及一种蛹虫草液体发酵菌种的培育方法和应用。

背景技术

蛹虫草（Cordyceps militaris）隶属于真菌界（Fungi）、子囊菌门（Ascomycota）、子囊菌纲（Ascomycetes）、粪壳菌亚纲（Sordariomycetidae）、肉座菌目（Hypocreales）、麦角菌科（Clavicipitaceae）、虫草属（Cordyceps）。蛹虫草是非常著名的药食两用的子囊真菌，也是获得虫草素的主要来源，具有很高的开发利用价值。因野生的虫草十分稀少，资源极缺，为满足市场需求，正积极推进虫草的人工培育，而且人工培育的虫草有效成分接近野生，部分含量甚至高于野生几倍或者几十倍。

在目前的相关技术中，通常都是试管种转接到液体培养液中，再以20℃以下200转/分钟发酵培养7天，即可得到液体生产种。但是，在这个摇床培养的过程中不能给液体菌种定时补充氧气，且液体菌种只能填充摇瓶容积的30%以下，存在摇制时间长、污染率高、发菌时间慢、菌种浓度低和生产效率不高等问题。

发明内容

本发明提供一种蛹虫草液体发酵菌种的培育方法，包括以下步骤：

1）将蛹虫草的纯菌种接种到液体培养液中，摇床培养得到萌发初期的液体菌种；

2）将摇床得到的液体菌种转接到发酵培养液中，通入无菌空气发酵培养得到发酵菌种。

本发明提供的蛹虫草液体发酵菌种的培育方法，获得的菌种活力高，菌球繁殖速度快，污染率低，从而提高了蛹虫草子实体的生产效率和产量。

进一步，所述步骤1）中的纯菌种通过孢子弹射或组织分离后得到。

进一步，所述步骤1）中的液体培养液按照重量份数计，包括：马铃薯9-10份，葡萄糖0.8-1份，蛋白胨0.4-0.5份，酵母浸粉0.4-0.5份，磷酸二氢钾0.09-0.1份，硫酸镁0.04-0.05份，脱脂蚕蛹粉0.09-0.1份，水50-60份，维生素B1 0.0009-0.001份。

进一步，所述步骤1）中的液体培养液按照重量份数计，包括：马铃薯9.5份，葡萄糖0.9份，蛋白胨0.45份，酵母浸粉0.45份，磷酸二氢钾0.093份，硫酸镁0.047份，脱脂蚕蛹粉0.094份，水54份，维生素B1 0.00095份。

进一步，所述步骤2）中的发酵培养液按照重量份数计，包括：马铃薯4.6-5份，葡萄糖0.9-1份，蛋白胨0.25-0.3份，磷酸二氢钾0.09-0.1份，硫酸镁0.09-0.1份，脱脂蚕蛹粉0.09-0.1份，水50-60份，维生素B1 0.0009-0.001份。

进一步，所述步骤2）中的发酵培养液按照重量份数计，包括：马铃薯4.8份，葡萄糖1份，蛋白胨0.25份，磷酸二氢钾0.1份，硫酸镁0.1份，脱脂蚕蛹粉0.1份，水50份，维生素B1 0.001份。

进一步，所述蛋白胨中总氮含量不低于13.5%，氨基酸含量不低于3%。

进一步，所述步骤1）中，以200r/min摇床培养2-3天，培养温度为20-23℃。

进一步，所述步骤2）中，通入无菌空气培养5天，培养温度为20-21℃。

进一步，所述步骤2）中，在避光的环境下发酵培养。

进一步，制备培养液所使用的水为矿泉水或蒸馏水，PH值为6-7。

本发明蛹虫草液体发酵菌种的培育方法可广泛用于蛹虫草的培育中，从而提高蛹虫草子实体的生产效率和产量。

本发明提供一种培育蛹虫草的方法，包括：将上述蛹虫草液体发酵菌种的培育方法制备的发酵菌种转接至子实体培养基，继续进行培养。

进一步，将上述蛹虫草液体发酵菌种的培育方法制备的发酵菌种转接至固体培养基，放置到暗培室避光培养得到菌丝体，将菌丝体转色，进行子实体培养。

本发明采用摇床培养与发酵罐发酵培养相结合的方式，解决了背景技术存在的问题。并且，使用的培养液可提供最合适的碳氮比，营养更全面，使虫草在发菌过程中发菌快、稳定，减少菌种的退化，增强抵抗力。与采用传统发菌方法和配方的培养液相比，本发明杂菌污染率降低了15%，后期蛹虫草产量增加了10%-15%。

具体实施方式