[发明专利]羟基积雪草酸类化合物的分离方法

说明书

本发明公开了一种羟基积雪草酸类化合物的分离方法。该分离方法通过采用超临界流体色谱仪进行分离，色谱柱采用纤维素手性柱。该方法分离效果良好，分离得到的产品纯度高，分离速度快，同时色谱柱使用寿命长，溶剂价格低廉且无污染，并可回收再利用，大大提高了分离效率和降低了生产成本。

技术领域

本发明涉及羟基积雪草酸类化合物的分离方法。

背景技术

羟基积雪草酸(如式1所示)与积雪草酸B(如式2所示)为羟基积雪草酸类化合物，二者为同分异构体，分子式均为C₃₀H₄₈O₆(分子量为504)，其化学结构式如下所示：

羟基积雪草酸作为五环三萜类化合物，主要以糖苷或游离苷元形态存在于伞形科植物积雪草(Centellaasiatica)中，具有促进伤口愈合、抑制疤痕增生等作用。近年陆续有抗肿瘤、抗纤维化等研究报道及相关专利申请，如题为“一种羟基积雪草酸盐及其制备方法和用途”的中国专利申请CN201410046878.9中记载了羟基积雪草酸是其糖苷在胃肠道内的活性代谢形式，因此，用药时其生物利用度更优。然而，天然来源的羟基积雪草酸，多与一同分异构体积雪草酸B同时存在，二者的差异仅在C-19及C-20上甲基取代基的位置不同。由于二者理化性质极为相似，一般分离条件难以实现其有效分离。本研究小组以高效液相色谱法，采用反相C₁₈色谱柱并在流动相中添加β-环糊精的方法，可基本实现分离，但因流动相中加入β-环糊精，不仅影响色谱柱的使用寿命、容易造成液相色谱通道堵塞、污染吸收池等，而且因分离产物中混有β-环糊精不适合用于制备，因此急需开发一种新的分离方法适用于羟基积雪草酸与其同分异构体积雪草酸B的分析及制备。

发明内容

本发明所解决的技术问题是为了克服现有技术中羟基积雪草酸及积雪草酸B在高效液相色谱中采用反相C₁₈色谱进行分离时，流动相中的β-环糊精影响色谱柱的使用寿命、容易造成液相色谱通道堵塞及污染吸收池等问题，从而提供了一种羟基积雪草酸及积雪草酸B分离方法。该方法通过采用超临界流体色谱仪进行分离，色谱柱采用纤维素手性柱。该方法分离效果良好，分离得到的产品纯度高，分离速度快，同时色谱柱使用寿命长，溶剂价格低廉且无污染，并可回收再利用，大大提高了分离效率和降低了生产成本。

本发明提供了一种羟基积雪草酸类化合物的分离方法，其包含以下步骤：采用超临界流体色谱仪对羟基积雪草酸类化合物进行分离，色谱柱采用纤维素手性柱；所述羟基积雪草酸类化合物包含羟基积雪草酸和积雪草酸B。

本发明中，所述纤维素手性柱是指在高纯多孔硅胶基质上涂覆或键合不同衍生化纤维素作为固定相的手性柱；所述固定相可为微晶三醋酸基、三安息香酸基或三苯基氨基酸盐纤维素。

所述三苯基氨基酸盐纤维素优选氯代纤维素三苯基氨基甲酸酯衍生物，进一步优选纤维素-三(3-氯-4-甲基苯基氨基甲酸酯)或纤维素-三(3,5-二氯苯基氨基甲酸酯)。

所述分离方法中，所述纤维素手性柱优选Pheno Lux Cellulose-2或CHIRALPAKIC-3，进一步优选Pheno Lux Cellulose-2。

所述分离方法中，所述纤维素型手性柱可为分析型或制备型纤维素手性柱；当所述纤维素手性柱为分析型时，所述纤维素手性柱规格可参考本领域的常规规格，例如长度为150mm，内径为4.6mm，硅胶粒径为3μm；当所述纤维素手性柱为制备型时，所述纤维素手性柱规格可参考本领域的常规规格，例如长度为250mm，内径为30mm，硅胶粒径为5μm。

所述分离方法中，较佳地，所述羟基积雪草酸类化合物为羟基积雪草酸和羟基积雪草酸B的混合物。