[发明专利]一种干细胞提取物及其制备方法与在制备皮肤创面修复制剂中的应用

说明书

本发明涉及皮肤创面愈合技术领域，尤其涉及一种干细胞提取物及其制备方法与在制备皮肤创面修复制剂中的应用。本发明提供的干细胞提取物中，主要包括EGF、FGF23、VEGF、PDGF、KGF和FIBRONECTIN。提取物中的各种生长因子相互配合，产生协同增效作用，从而对创面的修复起到良好的促进作用。本发明提供的干细胞提取物为干细胞经IL‑6刺激培养后，以PEG沉淀后获得，该提取方法获得的提取物中，各因子的组成合理，能够用于制备皮肤创面修复制剂。

技术领域

本发明涉及皮肤创面愈合技术领域，尤其涉及一种干细胞提取物及其制备方法与在制备皮肤创面修复制剂中的应用。

背景技术

皮肤创面愈合是一个复杂的生物学过程，该过程是在各种细胞因子参与下的细胞与细胞、细胞与细胞外基质之间的相互作用、相互调控过程。当皮肤损伤发生时，创面愈合大致分为3个阶段，主要是炎症反应阶段，肉芽组织形成阶段和再生上皮化阶段。多种细胞和细胞因子参与了创面愈合各个过程。随着组织创面修复研究的不断深入，人们更加期待从传统意义的创面修复过度到美学意义上的创面修复。近年来促进创面损伤修复的方法很多，经典方法主要包括：工业敷料类(银离子纱布)、工业级药物(生长因子涂抹剂)和组织工程类(组织工程猪皮)。但是这些方法存在的主要问题是引入外源物质、制备技术复杂、生产周期长、单一因子作用效果差等问题。

目前，大量研究表明：干细胞在促进创面愈合时主要通过旁分泌作用(干细胞分泌大量因子)从而抑制创面炎性反应、促进血管生成、改善细胞外基质环境，动员机体自身干细胞迁移到损伤部位，达到创面的修复目的。随着干细胞技术的发展，其已应用在组织生长发育、创面愈合和器官再生等多个领域。但是，此前的研究主要是通过收集培养干细胞的上清液进行创面治疗，而这种上清液含有很多外源物质，包括凋亡的细胞、细胞碎片和代谢废物，很难稳定保存，易污染，造成很多负面问题，不利于规范化生产制备。

如何能够通过适当的提取工艺将干细胞培养过程中产生的生长因子、外泌体等活性成分富集，且去除凋亡细胞、细胞碎片和代谢废物，则对创面的愈合能够起到更加积极的作用。然而，此前的提取技术并无法充分对干细胞培养物中的活性成分进行富集，所得提取物对创面愈合的促进效果也十分有限。

发明内容

有鉴于此，本发明要解决的技术问题在于提供一种干细胞提取物及其制备方法与在制备皮肤创面修复制剂中的应用；本发明提供的干细胞提取物含有丰富的生长因子，活性较高，能够缩短创面愈合的时间、提高创面愈合的质量。

本发明提供了一种干细胞提取物包括：EGF、FGF23、VEGF、PDGF、KGF和FIBRONECTIN。

本发明提供的干细胞提取中各组分的质量份为：

一些实施例中，本发明提供的干细胞提取中各组分的质量份为：

一些实施例中，本发明提供的干细胞提取中各组分的质量份为：

一些实施例中，本发明提供的干细胞提取中各组分的质量份为：

本发明提供的提取物中，富含多种活性因子，各因子相互配合、共同对创伤起到良好的修复作用，其修复效果显著优于单因子产品。实验表明，采用本发明提供的制剂对创面进行修复，10天创面愈合率可达80％。

本发明提供的干细胞提取物的制备方法包括

步骤1：干细胞以含有IL-6的HBSS缓冲液刺激培养2h，弃掉培养液，加入HBSS缓冲液培养2d，然后收集细胞培养的上清液；

步骤2：所述上清液经过滤后，滤液与PEG溶液A混合，经离心收集沉淀；