[发明专利]三维肺微组织模型的构建方法及应用

权利要求书

1.一种三维肺微组织模型的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)使用荧光蛋白分别标记LC-3的肺巨噬细胞与肺上皮细胞，然后共混于聚阴离子聚电解质的水溶液中，得到细胞共混液；

(2)利用静电液滴法将步骤(1)得到的所述细胞共混液滴入含二价金属离子的凝胶浴中，形成载细胞凝胶微球；

(3)将步骤(2)得到的所述载细胞凝胶微球培养14-28天，得到所述三维肺微组织模型。

2.根据权利要求1所述的三维肺微组织模型的构建方法，其特征在于：在步骤(1)中，LC-3的肺巨噬细胞与肺上皮细胞在荧光蛋白标记后，二者为不同颜色。

3.根据权利要求1所述的三维肺微组织模型的构建方法，其特征在于：在步骤(1)中，肺巨噬细胞为THP-1、RAW264.7或U937细胞，肺上皮细胞为BEAS-2B、A549、NCI-H441或TC-1细胞。

4.根据权利要求1所述的三维肺微组织模型的构建方法，其特征在于：在步骤(1)中，所述肺巨噬细胞与肺上皮细胞的个数比为1:2-2:1。

5.根据权利要求1所述的三维肺微组织模型的构建方法，其特征在于：在步骤(1)中，所述细胞共混液中的细胞密度为2×10⁵-1×10⁷cells/mL。

6.根据权利要求1所述的三维肺微组织模型的构建方法，其特征在于：在步骤(1)中，所述聚阴离子聚电解质为海藻酸钠、透明质酸、琼脂、明胶和果胶中的一种或几种。

7.根据权利要求1所述的三维肺微组织模型的构建方法，其特征在于：在步骤(1)中，所述聚阴离子聚电解质的水溶液的浓度为1％w/v-1.5％w/v。

8.根据权利要求1所述的三维肺微组织模型的构建方法，其特征在于：在步骤(2)中，所述含二价金属离子的凝胶浴为含二价金属离子的氯化钠溶液，所述金属离子为钙离子、钡离子、镁离子和铁离子中的一种或几种。

9.根据权利要求1-8中任一项所述的方法所构建的三维肺微组织模型作为体外检测和评价肺自噬效应模型的应用。

10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，包括以下步骤：

将待测物加入所述三维肺微组织模型中，定性或定量检测LC-3II在肺巨噬细胞与肺上皮细胞中的表达，以判定所述待测物引发的肺自噬效应类型。