[发明专利]一种猪精液有效精子数的检测方法

说明书

技术领域

本发明属于猪的人工授精技术领域，具体涉及猪精液有效精子数的检测过程。

背景技术

猪的人工授精技术自20世纪20年代开始在养猪业进行尝试，经过近1个世纪的发展，该技术已基本成熟并为国内外大部分猪场所接受。我国已发布了《种猪常温精液》（GB/T 23238-2009）与《猪常温精液生产与保存技术规范》(GB/T 25172-2010)的国家标准，标准中规定了种公猪常温精液的要求、抽样、试验方法、判定规则及标志、包装、贮存和运输等，对猪的人工技术的推广实施起到了重要作用。随着国家良种补贴项目的实施，一大批种公猪站建立起来，越来越多的猪场受益，降低了猪场饲养公猪的成本，目前规模化猪场基本上实现了由本交向人工授精的过渡。然而，在种公猪站和场内人工授精的实施过程中，尤其是精液的运输过程中，可能导致精液品质下降，甚至导致精液在输精前已失去活力，品质达不到国家标准（GB 23238-2009和GB/T 25172-2010）的要求，一些昂贵的检测设备（精子自动分析仪、密度仪等）在一般的猪场很难配备齐全，但常温精液在使用前仍要进行检查，判断是否可以继续使用，否则导致母猪的配种失败，延长了母猪的非生产天数，增加猪场的成本。

发明内容

为了实现快速检测猪精液中的有效精子数，本发明提供了一种猪精液有效精子数的简易检测方法。

一种猪精液有效精子数检测的操作步骤如下：

（1）准备计数板

在计数板的中部设有100个大小相同的计数池，所述计数池为小方格状，每个计数池的深度0.01mm、长和宽均为0. 1mm；

（2）检测准备

（2.1）将计数板放于显微镜载物台上，在计数板的底部设有恒温预热板，所述恒温预热板的温度为37℃；

（2.2）将一盖玻片平放于计数池上方，用移液器吸取0.05毫升的待检精液，滴于盖玻片的边缘，利用液体的毛细虹吸作用使精液吸入计数池；

（3）显微镜观察成像

首先，用10×目镜和10×物镜进行显微观察，以便找到计数池位置，然后将物镜调至25倍，观察每个计数池中的精子数量；在250倍的放大显微镜下拍摄成像；

（4）计数

（4.1）统计对角线上连续4个计数池中的精子数，精子数的平均值，记作M；

（4.2）统计所述对角线上连续4个计数池中呈直线运动的运动精子数，运动精子数的平均值，记作X；

（5）统计分析精子密度、精子活力和有效精子数

精子密度（亿/ml）：M/10；

精子活力：X/M；

有效精子总量（亿）：（M/10）×V ×精子活力；

所述V为采集的猪精液总体积。

进一步限定的技术方案如下：

所述待检精液为现采集的新鲜猪精液或稀释好的常温精液。

每份稀释好的常温精液的体积为80毫升，有效精子数为25~40亿，保存温度17℃，保存时间为5天以内。

本发明的有益技术效果体现在以下方面：

（1）本发明通过大量的实践，验证分析，整理出一套适合鲜精和常温精液中有效精子数的简易分析方法，可快速检测新鲜精液的密度，获得有效精子数，并计算出最多可稀释精液的份数；适用于大、中、小型猪场对精液的快速检测。

（2）操作简单，即可全程分析精液品质，如精子计数板、盖玻片、普通显微镜。更适合不具备自动化精液分析仪的猪场对精液使用前的现场检测。

（3）计算方法简单，精液检测时单个小方格中的精子数除以10所得到的数即为精子密度；呈直线运动的精子数除以总精子数即为精子活力；精子活力乘以总精子数即为有效精子数。

附图说明

图1为本发明计数板结构示意图。

图2为新鲜猪精液放大250倍后显微镜观察图。

图3为稀释猪精液放大250倍后显微镜观察图。

具体实施方式

下面结合附图，通过实施例对本发明作进一步地说明。

实施例1（新鲜猪精液）

（1）检测准备

参见图1，在计数板的中部设有100个大小相同的计数池，计数池为小方格状，每个计数池的深度0.01mm、长和宽均为0. 1mm。

将计数板放于显微镜载物台上的恒温预热板上，调节恒温预热板的温度为37℃；将一盖玻片平放于计数池上方；

（2）刚采集的新鲜猪精液，用采精杯测量本次采集的精液量，为260ml；