[发明专利]一种类球红细菌高产菌株的遗传转化方法在审
| 申请号： | 201710304477.2 | 申请日： | 2017-05-03 |
| 公开（公告）号： | CN108795968A | 公开（公告）日： | 2018-11-13 |
| 发明（设计）人： | 张立新;徐峥;陈必钦;谭高翼;苗靳;朱志春;戴昌华;钟锦潮;王霄凤 | 申请（专利权）人： | 华东理工大学;内蒙古金达威药业有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/74 | 分类号： | C12N15/74;C12N15/65;C12N1/21;C12P7/66;C12R1/01 |
| 代理公司： | 北京纪凯知识产权代理有限公司 11245 | 代理人： | 关畅 |
| 地址： | 200237 上海市徐汇区*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 高产菌株 类球红细菌 球红细菌 遗传转化 电转化 野生型菌株 可重复性 重组菌株 接合 转移法 辅酶 构建 | ||
1.一种类球红细菌的转化方法，包括如下步骤：
(1)将类球红细菌接种于培养基中进行培养，收集菌体；将所述菌体依次进行洗涤和重悬后，得到类球红细菌感受态细胞；
所述类球红细菌感受态细胞的OD值为7.7-9.3；
(2)将外源质粒与所述类球红细菌感受态细胞混合，得到细胞混合物，将所述细胞混合物进行电击转化，得到重组菌。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：
所述外源质粒与所述类球红细菌感受态细胞的配比为1ng：(0.75-1.50)μL。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：
所述培养的方法为将类球红细菌株接种于培养基中培养至OD值为0.58-0.70。
4.根据权利要求1-3中任一所述的方法，其特征在于：所述电击转化的电压为(0.8-1.8)kv；
或，所述电击转化的时间为5ms。
5.根据权利要求1-4中任一所述的方法，其特征在于：所述洗涤和重悬的方法包括如下步骤：用水洗涤所述菌体，得到洗涤后菌体；再用甘油水溶液重悬所述洗涤后菌体，得到重悬后菌体，即为类球红细菌感受态细胞。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于：
所述水为去离子水；
或，所述洗涤的次数为2次；
或，所述甘油水溶液的体积分数为10％。
7.根据权利要求1-6中任一所述的方法，其特征在于：
所述电击转化后还包括复苏培养的步骤；
或，所述复苏培养的条件为32℃，150rpm复苏2小时。
8.根据权利要求1-7中任一所述的方法，其特征在于：所述类球红细菌为类球红细菌Rhodobacter sphaeroides JDW-610或野生型类球红细菌Rhodobacter sphaeroides。
9.权利要求1-8中任一所述的重组菌。
10.权利要求1-8中任一所述的重组菌在生产辅酶Q10中的应用。
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