[发明专利]一种利用Silwet L-77提高化学法转化大肠杆菌效率的方法

说明书

本发明公开一种生物技术领域的发明方法，利用表面活性剂Silwet L‑77提高化学法转化大肠杆菌效率的方法，其包括以下步骤：化学法制备大肠杆菌（E.coli）感受态细胞；配置浓度为0.05%~0.25%的的Silwet_L‑77母液；将质粒DNA和Silewet_L‑77加入感受态细胞，热激转化后获得克隆，本发明可以显著地提高化学法转化大肠杆菌的效率。而使用表面活性剂提高质粒转化大肠杆菌效率的方法尚未见报道。

技术领域

本发明属生物技术领域，具体是涉及一种利用Silwet L-77提高化学法转化大肠杆菌效率的方法，可使用表面活性剂Silwet L-77提高化学法转化大肠杆菌的效率。

背景技术

质粒DNA转化大肠杆菌是现代分子生物学实验室最常用的技术之一。Cohen等(1972; 1973)利用Ca2+处理大肠杆菌细胞使其可以成功地被质粒DNA转化，这种化学转化方法便于制备操作，是目前大多数实验室的常用方法。Dower等(1988)也发现了一种高转化率方法：电转化。虽然电转转化效率高，但它需要特殊的仪器，而且整个转化过程需要非常低的盐离子浓度，对普通实验室操作而言，有诸多不便。Inoue等(1990)为质粒转化建立了一种简单和有效的方法(SEM: simple and efficient method)。Hanahan等(1991; 1983)研究了Ca2+，Mg2+，DMSO，Mn2+等对转化效率的影响，对化学转化方法做了进一步的改进。

此后，一直有研究对化学转化法的各个步骤和条件做进一步地优化，如培养细菌时的温度及浓度、保存感受态细胞时不同的防冻剂、及其他不同的添加剂对转化效率的影响，并取得了较好的进展(李代宗等, 2006; 刘静华等, 2008; 杨坤等, 2010; 魏琦超和畅丽萍, 2009; 唐颜苹等, 2008)。

本发明首次发现使用表面活性剂Silwet L-77能显著地提高大肠杆菌的转化效率，国内外尚无相关的报道。

发明内容

本发明要解决的问题是发现一种使用表面活性剂Silwet L-77提高化学法质粒转化大肠杆菌效率的方法，该方法省时、简单、有效，适用于不同的化学法制备的感受态细胞的转化。

本发明是这样实现的：

一种利用Silwet L-77提高化学法转化大肠杆菌效率的方法，包括以下步骤：

步骤一、用Inoue的方法或CaCl₂法制备大肠杆菌DH5α感受态细胞，每个1.5ml的Eppondorf试管分装100μl，备用；

步骤二、配置浓度为0.05%~0.25%的Silwet L-77母液，备用；

步骤三、在100μl的DH5α感受态细胞中加入1μ浓度为1ng-1μg/μl的质粒DNA, 加入1μ步骤二中的母液。

步骤四、冰浴10分钟，42摄氏度热激90秒，冰浴3分钟后加入700μl SOC培养基，37摄氏度震荡培养45分钟后，5000rpm离心5分钟集菌，去700μl上清后重选菌体，涂布固体平板，37摄氏度培养10~12小时。

本发明的有益效果为：通过在转化体系中加入15~20ppm的Silwet L-77，可以显著地提高质粒DNA在大肠杆菌中的转化效率，该方法简单易行，并且适用于多种化学法制备的感受态细胞。

附图说明

图1是不同浓度Silwet L-77对质粒转化大肠杆菌效率的影响。

具体实施方式

本发明的保护范围不局限于所述内容，实施例中使用的试剂和方法，如无特殊说明，均采用常规试剂和使用常规方法。