[发明专利]马鞭草主要成分的含量测定方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种物质含量测定方法，尤其是马鞭草主要成分的含量测定方法，属于化学检测技术领域。

背景技术

马鞭草为马鞭草科植物马鞭草Verbena officinalis L.的干燥地上部分。其性凉、味苦、无毒，具有活血散瘀、解毒、利水、退黄、截疟的功效。齐墩果酸和熊果酸是马鞭草的主要有效成分，也是评价马鞭草质量的重要指标，2015年版中国药典对马鞭草中齐墩果酸和熊果酸的总量进行了规定。此外，有报道研究马鞭草苷、戟叶马鞭草苷、毛蕊花糖苷、马鞭草苷等马鞭草药材活性成分。指纹图谱具有系统性、特征性和重现性的特点，能较全面地反映中药的品质，现已成为控制中药质量的有效途径之一。曾有研究以紫外检测器(UV)为检测手段，采集马鞭草药材的指纹图谱，并结合相似度分析，用于12批马鞭草药材的评价。紫外检测器有灵敏度高、稳定性好、可兼容多种模式的色谱分离等优点，但只适用于具有紫外特征吸收基团化合物的分析，无法检测弱紫外吸收和无紫外吸收化合物。齐墩果酸和熊果酸在紫外区只有末端吸收，响应值较低且存在背景干扰，不易采用紫外检测器进行定量分析。通用型检测器不仅可以为强紫外吸收化合物提供较好的响应，还可以为弱紫外吸收和无紫外吸收化合物提供良好的响应。因此，采用蒸发光散射(ELSD)、示差折光检测器(RID)等通用型检测器得到指纹图谱被越来越多地用于中药材的评价中。电雾式检测器(CAD)是近年来发展起来的一种新型通用型检测器，与RID相比，CAD具有可兼容梯度洗脱、对环境温度的变化不明感、灵敏度高和重复性好等优点，与ELSD相比，CAD具有线性范围宽、灵敏度高、重复性好和具有结构响应一致性等优点。

发明内容

针对上述技术问题，本发明的目的是一种马鞭草主要成分的含量测定方法，该方法线性范围宽、灵敏度高、重复性好。

为解决上述技术问题，本发明的技术方案是这样的：

一种快速溶剂萃取-电雾式检测器同时测定酸枣仁中4种成分，依次包括下述步骤：

1)对照品储备液的制备

分别精密称取酸枣仁皂苷A、酸枣仁皂苷B、斯皮诺素、白桦脂酸对照品适量，加甲醇溶解并定容至刻度，制成质量浓度分别为酸枣仁皂苷A4.1802mg.mL^-1、酸枣仁皂苷B 5.088mg.mL^-1、斯皮诺素4.7304mg.mL^-1、白桦脂酸4.272mg.mL^-1的对照品储备液，于冰箱中保存，备用；

2)供试品溶液的制备

取本品粉末1g，精密称定，与1g硅藻土混合均匀填充于10mL萃取池，按ASE正交设计优化的条件进行先除杂再提取，除杂过程：用正己烷在80℃静态萃取8min，循环萃取1次，萃取液弃去并氮气吹扫300s；提取过程：萃取溶剂为甲醇，萃取温度100℃，静态萃取时间8min，萃取循环次数为1次，冲洗体积60％，氮气吹扫时间为60s；得到25mL萃取液回收溶剂至干，残渣加甲醇溶解，转移至5mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

3)色谱条件及系统适应性试验

注入色谱仪检测检测，所述色谱柱Thermo Syncronis C18，流动相为乙腈-水，梯度洗脱程序为0～8min，10％～60％乙腈；8～10min，60％～80％乙腈；10～13min，80％～100％乙腈；13～16min，100％乙腈；流速0.5mL.min^-1，柱温40℃，雾化温度35℃，进样量1μL，各成分色谱峰计算的理论塔板数均≥4000。

本发明与现有技术相比，具有以下优势：

本申请采用HPLC-CAD建立马鞭草的指纹图谱，共标定了17个共有峰，确认10号峰为齐墩果酸、11号峰为熊果酸，5批马鞭草药材的相似度均在0.95以上，说明不同产地的马鞭草药材相似度较高，5个样品中齐墩果酸的相对峰面积的RSD值较小，提示马鞭草中齐墩果酸与熊果酸含量具有一定的相关性。其余共有峰相对峰面积的RSD值相差较大，说明不同产地药材所含化学成分的相对含量差异较大，因此可采用指纹图谱方法，全面评价药材的质量。

附图说明

图1是5批马鞭草药材样品指纹图谱；

图2是混合对照品(A)和批号1507103样品(B)CAD色谱图

图3马鞭草药材(批号1507103)DAD(205nm)指纹图谱

图4 C18固定相分离齐墩果酸和熊果酸色谱图。

具体实施方式