[发明专利]一种通过超声波复合酶制剂处理高温豆粕分离纯化制备水溶性糖肽的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种利用超声波复合酶制剂制取高温豆粕水溶性糖肽的方法。

背景技术

豆粕作为大豆油脂加工的副产物，其产量巨大。近几年来，我国豆粕产量增长迅速，年复合增长率为10％左右，2015年豆粕产量为6120万吨，约占世界豆粕产量的26.92％，并且80％为高温豆粕。高温豆粕蛋白质含量为40～50％，但因高温长时间处理，使其水溶性蛋白质高度变性，导致蛋白质提取率较低，严重降低了高温豆粕深加工产品的开发及其使用价值。高温豆粕目前主要作为饲料的蛋白源应用，动物饲料的60％蛋白源来自于大豆的高温豆粕。

由于豆粕中的纤维素和果胶形成复杂的网状结构，并与蛋白质一起形成聚合物构成细胞壁，普通物理、化学或酶制剂等加工方法难以获得蛋白质。因此，提取蛋白质有效的方法是首先破坏完整的细胞壁结构，使包埋于细胞内蛋白质的溶出，提高蛋白提取率，对高温豆粕中蛋白质的开发与利用具有重要的经济价值和社会意义。近几年，从事糖肽的研究单位也多从医药角度出发，研究力量及投入较少，在食品领域中研究也较少。

发明内容

本发明为了提高高温豆粕的附加值，提供了一种工艺先进、工序合理、操作易控的通过超声波复合酶制剂处理高温豆粕分离纯化制备水溶性糖肽的方法。

本发明的目的是通过以下技术方案实现的：

一种通过超声波复合酶制剂处理高温豆粕分离纯化制备水溶性糖肽的方法，包括如下步骤：

(1)原料的选取与处理

选取高温豆粕为原料，打碎，过筛，备用。

(2)超声波复合纤维素酶酶解处理

将步骤(1)中选取的高温豆粕用热水充分溶解，控制高温豆粕浓度为2～10g/100ml，进行超声波和纤维素酶酶解处理。

(3)蛋白酶酶解处理

将步骤(2)中制得的酶解液加入蛋白酶进行酶解，酶灭活，用HCl调节为酸性，离心，取上清液调至中性。

(4)粗品糖肽的制备

将步骤(3)中制得酶解上清液过滤，取滤液加入乙醇沉淀，放置24～48小时，沉淀复溶，冷冻干燥，得到粗品糖肽。

(5)纯品糖肽的制备

将步骤(4)中制得的粗品糖肽用缓冲液溶解，依次进行离子交换层析、透析、凝胶色谱层析，冷冻干燥，得到纯品糖肽。

步骤(1)中，所述的高温豆粕打碎过40～100目的筛子。

步骤(2)中，所述的热水温度为60～70℃。

步骤(2)中，所述的超声波和纤维素酶酶解处理的方法为：超声波同步纤维素酶酶解处理。

步骤(2)中，所述的超声波处理的条件为：超声功率100～400W，超声时间10～60min。

步骤(2)中，所述的纤维素酶酶解条件为：纤维素酶酶活添加量300～1500U、纤维素酶酶解pH 3.5～5.5。

步骤(3)中，所述的蛋白酶为碱性蛋白酶。

步骤(4)中，所述的过滤为抽滤器过滤。

步骤(4)中，所述的乙醇为无水乙醇，滤液中乙醇终浓度为60～90％。

步骤(5)中，所述的缓冲液为0.01M Tris-HCl，pH值为7.2。

步骤(5)中，所述的离子交换层析采用DEAE Cellulose 52离子柱。

步骤(5)中，所述的凝胶色谱层析采用Sephadex G-25柱层析，用去离子水为洗脱液进行洗脱。

本发明选取高温豆粕为原料，用热水进行溶解，首先采用超声波复合纤维素酶酶解高温豆粕，高效破坏细胞壁，细胞内蛋白质的溶出，再利用蛋白酶作用条件温和，有效保持多肽的活性等特点采用蛋白酶酶解，酶解液使用乙醇沉淀获得粗品糖肽。粗品糖肽根据性状、等电点和分子量大小进行离子交换层析和凝胶色谱层析获得水溶性糖肽。

本发明有效的利用高温豆粕，大大提升了高温豆粕的经济价值，制取的高温豆粕水溶性糖肽纯度高，在不同的pH条件下，水溶性糖肽的溶解度＞80％，并且存在O-糖肽键、糖环为吡喃环、糖苷键的构型为α-型糖苷键结构的一种高品质的活性功能助剂——高温豆粕水溶性糖肽。

附图说明

图1为高温豆粕糖肽在不同pH值下的NSI；

图2为β-消除前后高温豆粕糖肽的紫外扫描图谱；

图3为高温豆粕糖肽的红外光谱图。

具体实施方式

下面结合附图对本发明的技术方案作进一步的说明，但并不局限于此，凡是对本发明技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的精神和范围，均应涵盖在本发明的保护范围中。