[发明专利]一种用于检测莫西菌素的多克隆抗体及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种用于检测莫西菌素的多克隆抗体及其制备方法和应用。本发明首先保护一种化合物(一种半抗原)，结构式如式(Ⅰ)所示。本发明还保护式(Ⅰ)所示化合物与载体蛋白偶联得到的偶联物。本发明还保护以所述偶联物为免疫原得到的抗体。所述抗体具体可为多克隆抗体。本发明还保护一种用于检测莫西菌素的试剂盒，包括所述多克隆抗体。本发明首次对莫西菌素结构进行了改造，得到半抗原，制备了莫西菌素的多克隆抗体，填补了国内外空白。利用本发明提供的半抗原与载体蛋白的偶联物制备莫西菌素抗体，制备过程简单、经济、灵敏度高、实用价值高。本发明在兽药残留检测中具有良好的应用前景。

技术领域

本发明涉及一种用于检测莫西菌素的多克隆抗体及其制备方法和应用。

背景技术

莫西菌素(Moxidectin,MXD)是由一种链霉菌发酵产生的半合成的新型大环内酯类药物。莫西菌素具有广谱驱虫活性，对犬、牛、绵羊、马的线虫和节肢动物寄生虫均有高度驱除活性。由于驱虫活性高，药效时间长等，莫西菌素在国内外的应用越来越广泛，有取代阿维菌素的趋势。

在促进畜牧业发展的同时，由于不合理使用甚至滥用，导致莫西菌素在动物性食品中残留甚至引起耐药虫体的产生，严重威胁着人类的健康以及生态环境的稳定。

1990年欧盟2377/90规定，在动物(牛、羊、马)肝脏中莫西菌素最高含量为0.1mg/kg，在动物(牛、羊、马)肌肉和肾脏中莫西菌素最高含量为0.05mg/kg，在奶(牛奶、羊奶)中莫西菌素最高含量为0.04mg/kg。

开发一种简单、快捷、用于检测莫西菌素的多克隆抗体显得尤为重要。

发明内容

本发明的目的是提供一种用于检测莫西菌素的多克隆抗体及其制备方法和应用。

本发明首先保护一种化合物(一种半抗原)，结构式如式(Ⅰ)所示；

本发明还保护一种制备式(Ⅰ)所示化合物的方法，包括如下步骤：莫西菌素与琥珀酸酐反应，得到所述化合物。

所述方法为琥珀酸酐法。

莫西菌素与琥珀酸酐的配比为1.012g：0.5g。

所述反应在无水吡啶中进行。

所述反应的反应条件为：48℃、240rpm、避光、9h。

本发明还保护式(Ⅰ)所示化合物与载体蛋白偶联得到的偶联物。所述载体蛋白为BSA或OVA。当载体蛋白为BSA时，偶联物命名为MXD-BSA。当载体蛋白为OVA时，偶联物命名为MXD-OVA。所述偶联物中，一个载体蛋白分子上平均偶联4.5个式(Ⅰ)所示化合物。

本发明还保护一种制备所述偶联物的方法，包括如下步骤：采用活化酯法将载体蛋白偶联于式(Ⅰ)所示化合物的羧基碳上。

所述偶联物的制备方法如下：

(1)式(Ⅰ)所示化合物溶解于DMF中，得到半抗原溶液；

(2)取半抗原溶液，加入EDC和NHS，反应；

(3)载体蛋白溶于含DMF的PBS缓冲液中，得到蛋白溶液；

(4)将完成步骤(2)的液相逐滴加入到步骤(3)制备的蛋白溶液中。

所述偶联物的制备方法具体如下：

(1)20mg式(Ⅰ)所示化合物溶解于1mL DMF中，得到半抗原溶液；

(2)取半抗原溶液，加入20mg EDC和20mg NHS，400rpm室温反应2h；

(3)50mg载体蛋白溶于3mL含10％(体积百分含量)DMF的PBS缓冲液中，得到蛋白溶液；