[发明专利]重组衣原体噬菌体衣壳蛋白1及制备方法与用途

说明书

本发明公开了一种对沙眼衣原体生长具有特异性抑制作用的重组噬菌体衣壳蛋白1(Recombinant phage capsid protein1，R‑phage‑Cp1)及制备方法与用途。本发明应用分子克隆等基因工程技术，从豚鼠结膜炎衣原体噬菌体（phiCPG1）基因组中用PCR技术克隆出其衣壳蛋白1基因，进行针对沙眼衣原体PmpI的修饰，成为拟沙眼衣原体噬菌体衣壳蛋白基因1。其与原核表达质粒pet30a(+)定向连接构建表达载体。表达纯化出的重组噬菌体衣壳蛋白1(R‑phage‑Cp1）作用于沙眼衣原体标准株D‑K型和临床分离株，大肠杆菌、支原体等多种微生物，结果证实R‑phage‑Cp1蛋白对沙眼衣原体具有明显的特异性抑制作用。体内动物实验显示R‑phage‑Cp1蛋白对沙眼衣原体在恒河猴生殖道的感染具有一定的治疗作用。该蛋白有望用于临床治疗沙眼衣原体的泌尿生殖道感染，从而改善沙眼衣原体泌尿生殖道感染迁延难治、易于复发和耗资巨大的现状。

技术领域

本发明涉及生物医药技术领域，具体地说是涉及一种针对沙眼衣原体有特异抑制作用的重组衣原体噬菌体外膜R-phage-Cp1蛋白及其制备方法与用途。

背景技术

沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis, 简写为C.t)泌尿生殖道感染是近年来国内外最常见的性传播疾病。

由于沙眼衣原体特殊的生物学特性，抗菌素治疗的效果并不令人满意，难以将其从人体彻底清除。随着近年来耐药C.t株的报道越来越多，许多学者把精力投入到了衣原体预防性和治疗性疫苗的研究中，包括蛋白疫苗、多肽疫苗、亚单位疫苗，甚至DNA疫苗，但迄今为止尚未获得具有免疫保护作用的疫苗。沙眼衣原体感染已成为威胁人类的公共健康难题。

国际衣原体流行趋势和新近研究显示：把衣原体这一具有特殊生物学特性的病原体作一般细菌给予抗菌素治疗可能没有前途,衣原体噬菌体可能会成为解决这个难题最重要的途径，有研究显示豚鼠结膜炎衣原体的噬菌体phiCPG1能够使宿主衣原体的生活周期受到抑制，使具有感染性的原体减少，因此国内外都聚焦在衣原体噬菌体的发现和研究上，但迄今为止尚未发现沙眼衣原体噬菌体。衣原体噬菌体上的三种衣壳蛋白1，2，3，由开放读码框1、2、3编码，在衣原体噬菌体phiCPG1与CPAR39之间相似性高达99.5%，在噬菌体Chp2与Chp3之间的相似性也很高，目前认为该蛋白可能是潜在的受体结合区，与噬菌体对宿主的黏附、植入和识别过程有关。

发明内容

本发明的目的旨在为克服临床目前治疗沙眼衣原体的困境，选择对宿主衣原体生长周期具有抑制作用的噬菌体phiCPG1为研究对象进行优化，提供对沙眼衣原体生长具有抑制作用的重组衣原体噬菌体衣壳蛋白1（R-phage-Cp1）及制备方法与用途。本发明通过实验研究证实，所R-phage-Cp1对沙眼衣原体生长具有明显的抑制作用，具有重要的科研和临床价值。

为实现本发明的目的，本发明公开了一种对沙眼衣原体生长有特异抑制作用的衣原体噬菌体重组衣壳蛋白1（R-phage-Cp1），其特征在于该蛋白是从含有重组质粒/pet30a（+）的大肠杆菌中原核重组表达，并通过纯化得到的单一蛋白。

本发明还公开了一种制备所述重组衣原体噬菌体衣壳蛋白1（R-phage-Cp1）的方法，其特征在于从豚鼠结膜炎衣原体噬菌体phiCPG1提取噬菌体基因组DNA，PCR扩增出编码衣壳蛋白1的基因，针对沙眼衣原体衣壳蛋白1进行修饰成拟沙眼衣原体噬菌体衣壳蛋白1基因，再克隆到pet30a（+）载体质粒中构建成原核表达的重组质粒。重组质粒转化至大肠杆菌后，IPTG诱导表达蛋白，然后经过SDS-PAGE纯化。

本发明所述针对沙眼衣原体的重组衣原体噬菌体衣壳蛋白1（R-phage-Cp1）可以在泌尿生殖道沙眼衣原体感染性疾病的预防和治疗中应用。