[发明专利]富含载脂蛋白A的人血高密度脂蛋白制剂制造方法及应用

说明书

技术领域：

本发明提供一种富含载脂蛋白A的人血高密度脂蛋白制剂制造方法，同时还公开了富含载脂蛋白A的人血高密度脂蛋白制剂的医用用途，属于生物制药技术领域。

技术背景：

以动脉粥样硬化为病理基础的心脑血管病在许多国家是死亡率最高的疾病。上个世纪70年代以来，生物化学领域对高密度脂蛋白与动脉粥样硬化相关性研究日趋活跃。多方研究证实，高密度脂蛋白与动脉硬化呈负相关，且低密度脂蛋白与高密度脂蛋白的比值，对动脉粥样硬化的形成和发展更具决定意义。

目前，有望获得高密度脂蛋白制剂的其它制备工艺是：从低温乙醇法的FⅣ（组分4）继续用酒精沉淀获取高密度脂蛋白制剂，但未见获得制品的具体技术方法和制品活性检测的报道。

不言自明的是，乙醇对脂蛋白的损伤会比阳离子沉淀剂利凡诺要大得多。此为实现本发明的基本出发点。

发明内容：

本发明提供一种富含载脂蛋白A的人血高密度脂蛋白制剂的制造方法，制剂的收率比较高，生物活性强。

本发明进一步公开了一种富含载脂蛋白A的人血高密度脂蛋白制剂的医用用途，预示能够清除老年人（或其它原因引发的）动脉粥样硬化斑块，避免或减缓心肌梗塞和脑梗塞等严重疾病的发生。

本发明所述的一种富含载脂蛋白A的人血高密度脂蛋白制剂制造方法，包括以下步骤：

1.1 将低温乙醇法生产人血白蛋白和丙种球蛋白工艺中废弃的FⅣ加入不锈钢反应罐，以碳酸钠溶液调PH8.2~8.8，加入等体积2.4%~3.2%利凡诺溶液，充分搅拌后沉淀静止8~16小时，将上清和沉淀分离；

1.2 分离出上清液的粘稠沉淀在反应罐中解离，将下部混悬液泵入蓝氏离心机离心，甩干沉淀加入无热原蒸馏水稀释溶解，泵入压滤器中澄清；

1.3 澄清液以Sartocon-超滤器超滤脱盐，浓缩。浓缩液在2~6℃温度下静止6小时以上，除菌过滤，60℃ 10小时病毒灭火后，以生理盐水调至12毫克/毫升蛋白浓度分装，即得成品。3批收得率77.38%－－81.02%，平均收得率为79.20%.

本发明制备的富含载脂蛋白A的人血高密度脂蛋白制剂，经动物（兔）试验证实，可以显著降低总胆固醇，甘油三酯和低密度脂蛋白胆固醇，且能够去除动脉硬化斑块72%以上。上述试验预示，该制剂可以清除老年人（或其它原因引发的）动脉粥样硬化斑块，避免或减缓心肌梗塞和脑梗塞等严重疾病的发生，对于延长人类寿命具有重大意义。本发明对脂肪肝亦有明显疗效。

本发明的积极效果在于：

建立了富含载脂蛋白A的人血高密度脂蛋白制剂制造方法，工艺流程可重复性好，稳定性强；

建立了以某物质为特定保护剂的富含载脂蛋白A的人血高密度脂蛋白制剂的病毒灭活方法，即60°10小时的巴斯德加热法；

建立了富含载脂蛋白A的人血高密度脂蛋白制剂质量标准和鉴定规程；

完成了富含载脂蛋白A的人血高密度脂蛋白制剂的保存方法和稳定性试验，保存期在12个月以上；

完成了富含载脂蛋白A的人血高密度脂蛋白制剂去除兔实验性动脉粥样硬化疗效研究，效果十分可观（去除面积达72%以上），此作用和效果为现有其它药物所不具备。

附图说明

图1为本发明试验例主动脉壁直观图片；

图2为本发明试验例主动脉病理图片；

图3为本发明试验例肝脏病理图片。

具体实施方式

通过以下实施例进一步举例描述本发明，并不以任何方式限制本发明，在不背离本发明的技术解决方案的前提下，对本发明所作的本领域普通技术人员容易实现的任何改动或改变都将落入本发明的权利要求范围之内。

实施例1

1.1 将低温乙醇法生产人血白蛋白和丙种球蛋白工艺中废弃的FⅣ加入不锈钢反应罐，以碳酸钠溶液调PH8.5，加入等体积2.8%利凡诺溶液，充分搅拌后沉淀静止12小时，将上清和沉淀分离；

1.2 分离出上清液的粘稠沉淀在反应罐中解离，将下部混悬液泵入蓝氏离心机离心，甩干沉淀加入无热原蒸馏水稀释溶解，泵入压滤器中澄清；

1.3 澄清液以Sartocon-超滤器超滤脱盐，浓缩。浓缩液在2~6℃温度下静止6小时以上，除菌过滤，60℃ 10小时病毒灭火后，以生理盐水调至12毫克/毫升蛋白浓度分装，即得成品。收得率为77.38%.

实施例2