[发明专利]UCNPs‑Ab1和GNRs‑Ab2及其制备方法、甲胎蛋白的检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及化合物分析，具体地，涉及UCNPs-Ab₁和GNRs-Ab₂及其制备方法、甲胎蛋白的检测方法。

背景技术

甲胎蛋白(AFP)是一种癌胚糖蛋白，相对分子质量约为68000，由胎儿肝脏和卵黄囊合成，其在血清中的浓度长期升高被认为与肝癌、鼻咽癌和卵巢上皮性肿瘤有着一定的关系。目前，AFP被认为是较好的肿瘤标记物，因此，早期检测AFP对上述疾病的预防、诊断和治疗有着非常重要的临床意义。

在已创建的众多AFP的检测方法中，电化学检测法是检测AFP的主要方法。但是，现有的检测方法存在：检出限高，灵敏度低，实验步骤复杂，耗时耗力，仪器价格昂贵等问题。

发明内容

本发明的目的是提供一种UCNPs-Ab₁和GNRs-Ab₂及其制备方法、甲胎蛋白的检测方法，该检测方法通过利用UCNPs-Ab₁和GNRs-Ab₂检测甲胎蛋白使得其具有灵敏度高，检出限低，稳定性与选择性优良等优点，并且UCNPs-Ab₁和GNRs-Ab₂的制备方法具有条件温和原料易得的优点。

为了实现上述目的，本发明提供了一种UCNPs-Ab₁的制备方法，该制备方法包括：

1)将碱、水、油酸、C1-C3的醇、锰源、镱源、钇源、铒源和NaF进行搅拌，接着水热反应、离心分离得到OA-UCNPs(OA-NaYF₄:Yb，Er/Mn UCNPs)；

2)将OA-UCNPs分散于溶剂中，接着加入PAA(聚丙烯酸)水溶液进行配位体交换反应、离心分离得到PAA-UCNPs(羧基修饰的UCNPs)；

3)在EDC(碳二亚胺)和NHS(N-羟基琥珀酰亚胺)的存在下，将PAA-UCNPs分散于MES缓冲溶液(乙磺酸缓冲溶液)中并振荡孵育、分离和水洗，接着溶于PBS缓冲溶液，再加入抗体1二次振荡，随后加入BSA(牛血清白蛋白)三次振荡以封闭活性位点，离心水洗后得到UCNPs-Ab₁(NaYF₄:Yb，Er/Mn UCNPs-抗体1偶联体)。

本发明还提供了一种UCNPs-Ab₁，该UCNPs-Ab₁通过上述的制备方法制备而得。

本发明也提供了一种GNRs-Ab₂的制备方法，该制备方法包括：

1)将CTAB(十六烷基三甲基溴化铵)、金源、NaBH₄和水进行接触反应以得到GNRs种子液；

2)将将CTAB、金源、抗坏血酸和AgNO₃进行接触反应得到生长液；

3)将GNRs种子液与生长液进行接触反应、离心分离得到CTAB-GNRs；

4)将CTAB-GNRs溶于水形成CTAB-GNRs水溶液，接着将MUDA-乙醇溶液与CTAB-GNRs水溶液进行羧基修饰处理，然后离心、处理以制得MUDA-GNRs(羧基化的GNRs)；

5)在EDC和NHS的存在下，将MUDA-GNRs分散于MES缓冲溶液中并振荡孵育、分离和水洗，接着溶于PBS缓冲溶液，再加入抗体2二次振荡，随后加入BSA三次振荡以封闭活性位点，离心水洗后得到GNRs-Ab₂(GNRs-抗体2偶联体)。

本发明进一步提供了一种GNRs-Ab₂的制备方法，该GNRs-Ab₂通过上述的制备方法制备而得。

本发明更进一步提供了一种甲胎蛋白的检测方法，该检测方法包括：

1)将PBS缓冲溶液、UCNPs-Ab₁以及GNRs-Ab₂形成混合液，接着将混合液加入已知浓度的AFP溶液进行反应以得到样品溶液，然后将样品溶液加入含有过硫酸钾的PBS缓冲溶液中进行电化学发光能量转移反应并检测电化学发光强度，最后以AFP溶液的浓度为横坐标，电化学发光强度为纵坐标绘制工作曲线或者计算工作曲线方程；

2)将待检AFP溶液按照步骤1)的方法测得电化学发光强度，然后根据工作曲线或者工作曲线方程计算出待检AFP溶液的浓度。