[发明专利]一种鉴定常规棉花品种真实性的SSR分子标记方法

权利要求书

1.一种利用SSR分子标记鉴定常规棉花样品真实性的方法，其特征在于，所述利用SSR分子标记鉴定常规棉花样品真实性的方法，包括以下步骤：

样品的制备：每个品种选取15个单株，提取每个单株基因组DNA，再将每5个单株基因组DNA等量混合，制成3组样品进行SSR分析；

以提取的基因组DNA为模板，用26对SSR核心引物进行PCR扩增，将所得到的PCR扩增产物进行8％非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳，得到待检测样品的电泳图谱；所述26对SSR核心引物信息如下表所示：

编号	引物名称	染色体位置	fwd_Sequence5'_3'	rev_Sequence5'_3'
1	NAU2083	ch01	AGAAGAGGTTGACGGTGAAG	TGAGTGAAGAACCTGCACAT
2	NAU2277	ch02	GAACTAGCCACATGATGCAC	TTGTTGAGGCATTAGTTTGC
3	NAU1071	ch03	ACCAACAATGGTGACCTCTT	CCCTCCATAACCAAAAGTTG
4	BNL530	ch04	CGTAGGATGGAAACGAAAGC	GCCACACTTTTCCCTCTCAA
5	NAU1200	ch05	CAACAGCAACAACCACAA	CTGCCTCGAGGACAAATAGT
6	CGR5651	ch06	TTTGGCTTAGCATTTGGAGG	CCGATCACTGTCCGTCTCTT
7	BNL1694	ch07	CGTTTGTTTTCGTGTAACAGG	TGGTGGATTCACATCCAAAG
8	DPL0111	ch08	CTTTCATAATACATACGCCTTGCC	TCACAGCATCCTATCAGGTATCAG
9	CGR5707	ch09	AAACCCGATATCCTTAGCCTTT	GGAAAGGAGGAAGAGGAGGA
10	NAU879	ch10	AGGAACCGATTCAAAGCTAA	TTTCCCCATTCTTGGTTAAG
11	BNL3442	ch11	CATTAGCGGATTTGTCGTGA	AACGAACAAAGCAAAGCGAT
12	BNL598	ch12	TATCTCCTTCACGATTCCATCAT	AAAAGAAAACAGGGTCAAAAGAA
13	CGR5576	ch13	CGGTTCAACCCGACTGTTT	GAGGAAAGAAAGGAAGAGAGGG
14	CIR246	ch14	TTAGGGTTTAGTTGAATGG	ATGAACACACGCACG
15	NAU3736	ch15	CATGTGCATTTCATCCTGTC	CCAAGTGAGAGGCATTTTCT
16	MUSS95	ch16	GCAACCATTAATTAAGCAAGTAACAA	CGAAGAATATGTGAACCTACAGAAAC
17	HAU1413	ch17	CTGACTTGGACCGAGAACTT	AACCAGGACCGATGAAATAA
18	TMB2295	ch18	TGAGTTCATGTTCCCCACTG	CTAAACATACTCTGTCAAACAC
19	BNL3977	ch19	ATCCAAACCAACCATGCAAT	GAAGGGGTTTTGCATTTCAA
20	JESPR190	ch20	GCCCGCCATCTTTGAGGATCCG	GGCAAAACTTGACAATTTTCTCGGC
21	JESPR158	ch21	CACCATTCGGCAGCTATTTC	CTGCAAACCCTAGCCTAGACG
22	NAU2026	ch22	GAATCTCGAAAACCCCATCT	ATTTGGAAGCGAAGTACCAG
23	JESPR13	ch23	GCTCTCAAATTGGCCTGTGT	GGTGGAGGCATTCCTGCTAAC
24	BNL3452	ch24	TGTAACTGAGCAGCCGTACG	GCCAAAGCAGAGTGAGATCC
25	BNL3937	ch25	ACATCAAACAAAGCAAGCCA	ATCTCTGTTTTCTCCCCCGT
26	NAU1042	ch26	CATGCAAATCCATGCTAGAG	GGTTTCTTTGGTGGTGAAAC

对于每个品种同一位点上谱带不一致的3组样品，进一步分析构成该样品的15个单株的电泳图谱谱带，谱带不一致为非本品材料；

将每份待检测样品的电泳图谱与得到的标准对照样品的电泳图谱进行比较，如待测样品与标准对照样品差异标记数大于2，判读为不同品种；如待测样品与标准对照样品差异标记数大于0且小于等于2，判读为近似品种；如待测样品与标准对照样品差异标记数等于0，判读为相同或极近似品种；所述标准对照样品为源棉6号；

提取所述每个单株基因组DNA，采用改良的CTAB法结合自动磨样机快速磨样；

PCR扩增体系的总体积为10μL，由以下成分组成：

60ng/μL的DNA模板1μL，

4pmol/μL的正、反向引物各0.4μL，

10×Buffer 1μL，

2.5mmol/L的dNTP 0.8μL，

5U/μL的Taq酶0.1μL和ddH₂O 6.3μL；

PCR扩增的反应程序为：95℃预变性4min，1个循环；94℃变性45s，55℃退火35s，72℃延伸45s，共35个循环；72℃延伸7min，4℃保存。