[发明专利]一种基于液体活检的乳腺癌检测的试剂盒

说明书

本发明提供了一种基于液体活检的乳腺癌检测的试剂盒，所述试剂盒包括：用于增强染色效果的染色增强液和带荧光染色标记的特异性抗体；其中所述特异性抗体包括：ERα抗体、VIM抗体、CD45抗体和HER2抗体；所述染色增强液包括浓度为0.001～1mg/mL的表面活性剂。本发明的试剂盒，可以有效的富集目标细胞，并且确认是否来源于乳腺癌的早期患者，以及进行肿瘤分型。同时，通过三瘤标检测增加肿瘤检测灵敏度并且进一步通过CEP8的检测保证检测的准确性。此外本发明通过染色增强液加强染色效果，使多种带荧光染色标记的抗体都可以与目标细胞结合，对目标细胞染色，染色效果更好，荧光更强，而且边界清晰。

技术领域

本发明涉及液体活检领域，具体地说是一种基于液体活检的乳腺癌检测的试剂盒。

背景技术

乳腺癌是一种严重威胁女性健康的疾病，其发病率占所有肿瘤的23％，在女性中位居首位，致死率在所有癌症中也位居第二。据统计，在我国，每年平均每十万人口就有30～40名被诊断为乳腺癌患者，而且诊断为乳腺癌的平均年龄为45～55岁，比西方女性更加年轻。因而，对于乳腺癌的早期筛查以及疾病发展过程中的检测就显得尤为重要。

目前，针对乳腺癌的早期筛查，基于液体活检检测循环肿瘤细胞(CTC)的方法具有众多传统检测方法所没有的优势，包括无创、快捷、准确率高等优点。CTC是一种自发或因诊疗操作由实体瘤原发灶或转移灶释放进入外周血循环的肿瘤细胞。由于转移是癌症相关死亡的主要原因，而CTC被视为转移的种子，因此对CTC的检测在新的肿瘤生物标志物的发现、肿瘤预后判断及个体化治疗方面存在很大的应用潜力，是国内外肿瘤研究的热点之一。到目前为止，大多数乳腺癌CTC相关的研究主要集中于转移性乳腺癌(MBC)患者，而一些研究表明，在早期乳腺癌(EBC)患者中也同样存在CTC，其阳性率为9.4～48.6％。而血液中CTC的阳性率也与乳腺癌早期复发和低的生存期相关。其实，研究表明肿瘤在1mm时，血液中即可检出CTC，通过检测外周血循环中CTC的存在，可以在癌症的早期发现癌症。为此，有效的CTC捕获、富集分析方法对于基于CTC的早筛很重要。

虽然到目前为止，基于EpCAM的CTC捕获富集分析平台仍然被作为MBC中CTC检测的金标准，但是该方法是否适合用于EBC的检测仍存在争议，而且以EpCAM为生物标志物对于发生EMT的CTC的检测存在很高的假阴性，这一广谱的上皮生物标志物也不具有组织特异性，无法追溯CTC的具体组织来源，而这一点对于后续的肿瘤治疗具有重要意义。因此，发现并应用一些乳腺癌组织特异性的生物标志物进行CTC的检测分析显得尤为重要。

公告日为2014年1月15日，公告号为CN102313813B的中国专利中公开了一种通过免疫荧光染色对稀有细胞进行检测的方法，该方法对白细胞、稀有细胞和细胞核进行三色染色，再通过荧光检测。但是该方法仅能通过一种单抗来特异性识别该稀有细胞，容易造成漏检。同时，由于细胞的异质性，每个细胞表达的抗原量不一，导致有时荧光强度非常微弱，在荧光显微镜下难以分辨。

发明内容

本发明的主要目的是针对现有技术存在的不足提供一种基于液体活检的乳腺癌检测的试剂盒，利用该试剂盒可以检测外周血中CTC的数量，对该CTC进行溯源分析、肿瘤分型及早期筛查，同时荧光显示细胞膜边界清晰、检测结果灵敏度高。

本发明是通过如下技术方案实现的：

一种基于液体活检的乳腺癌检测的试剂盒，所述试剂盒包括：用于增强染色效果的染色增强液和带荧光染色标记的特异性抗体；

其中所述特异性抗体包括：ERα抗体、VIM抗体、CD45抗体和HER2抗体；

所述染色增强液包括浓度为0.001～1mg/mL的表面活性剂。

所述染色增强液的溶剂为生物缓冲液。