[发明专利]细胞活力检测试剂及其用途

说明书

本发明公开了一种细胞活力检测试剂及其用途，所述试剂盒包括缓冲液、wst‑8和吩嗪硫酸甲酯，所述wst‑8与吩嗪硫酸甲酯的摩尔比为15~25:1。采用本发明所述的细胞活力检测试剂，能够快速、精确的检测细胞的活力。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种细胞活力检测试剂，主要用于检测细胞的活力。

背景技术

细胞增殖是细胞生命活动的重要特征之一，是生物体生长、发育、繁殖以及遗传的基础。细胞增殖异常就会导致一系列疾病，比如再生障碍性贫血，动脉粥样硬化或恶性肿瘤等。细胞毒性是由化学物质作用于细胞基本结构或细胞的生理过程，如细胞膜或细胞骨架结构，细胞的新陈代谢过程，细胞组分或产物的合成，降解或释放，离子调控及细胞分裂等过程，导致细胞存活、增殖或功能紊乱，所引起的不良反应。细胞毒性是不依赖于凋亡或坏死的细胞死亡。

细胞增殖与细胞毒性的检测方法主要有：MTT法、XTT法、WST-1法及WST-8法等。MTT法是二十世纪八十年代发展起来的一种快速、简便的测试方法，已被广泛用于药物体外筛选实验，与以往细胞水平研究中检测细胞活性的两种常规方法——细胞计数法和同位素掺入法相比，MTT法具有操作简便、快速、准确及不使用同位素等优点。随着研究的发展，出现了MTT的升级替代产品，如XTT，WST-1及WST-8等。

WST-8(化学名：2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑单钠盐)是目前广泛应用的MTT升级产品，其工作原理为：在电子耦合试剂存在的情况下，可被线粒体内的脱氢酶还原生成高度水溶性的橙黄色的甲臜，颜色的深浅与细胞的增殖成正比，与细胞毒性成反比，使用酶标仪在450nm波长处测OD值，间接反映细胞数量。

WST-8相对前代具有明显的优点：首先，MTT被线粒体内的一些脱氢酶还原生成的甲臜不是水溶性的，需要特定的溶解液进行溶解，而WST-8和XTT、MTS产生的甲臜都是水溶性的，可以省去后续的溶解步骤。其次，WST-8产生的甲臜比XTT和MTS产生的甲臜更易溶解。再次，WST-8比XTT和MTS更稳定，使实验结果更加稳定。另外，WST-8和MTT、XTT等相比，线性范围更宽，灵敏度更高。

CCK8试剂盒是日本同仁化学研究所基于WST-8(化学名：2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑单钠盐)开发的细胞活力快速高灵敏度检测试剂盒，已广泛应用于药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药敏试验等领域。与上代MTT法等方法相比，CCK8法灵敏度更高，且不使用有机溶剂，对细胞毒性低，非常适合悬浮细胞高通量药物筛选，但存在价格昂贵、质量可靠性差、对PH值和温度比较敏感和药物影响大等缺陷。

发明内容

为了克服现有技术中所存在的问题，本发明的目的在于提供一种细胞活力检测试剂盒及其应用。

为了实现上述目的以及其他相关目的，本发明采用如下技术方案：

一方面本发明公开了一种细胞活力检测试剂，所述试剂包括缓冲液、wst-8和吩嗪硫酸甲酯，所述wst-8与吩嗪硫酸甲酯的摩尔比为15～20:1。

WST-8是指化学名：2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑单钠盐。

优选地，所述试剂盒中还包括醋酸钠，所述醋酸钠与吩嗪硫酸甲酯的摩尔比为0.1～0.2:1。

优选地，所述试剂盒中还包括丁酸钠，所述丁酸钠与吩嗪硫酸甲酯的摩尔比为0.05～0.1:1。

优选地，吩嗪硫酸甲酯的浓度为8～10mmol/L。

优选地，所述缓冲液选自水。

优选地，所述wst-8的原料纯度大于98％。