[发明专利]基因检测引物组、试剂盒及检测方法

说明书

本发明涉及基因工程及分子生物学领域，提供一种基因检测引物组，用于对含待测位点的核酸片段进行特异性扩增，所述待测位点包括CYP2C9基因上的rs1799853位点、rs1057910位点，以及VKORC1基因上的rs9923231位点中的至少一种，所述引物组包括rs1799853引物组、rs1057910引物组、rs9923231引物组中的至少一种。本发明还提供了一种基因检测试剂盒及检测方法。本发明的基因检测引物组能够对含上述待测位点的核酸片段进行特异性扩增，使得对CYP2C9基因和VKORC1基因突变的检测灵敏度高、假阳性率低；本发明采用第二代高通量基因测序技术对待测位点的基因型进行检测，使得检测周期短，通量高。

技术领域

本发明涉及基因工程及分子生物学领域，更具体地说，涉及一种基因检测引物组、试剂盒及检测方法。

背景技术

华法林（warfarin）是香豆素类口服抗凝血药，目前被广泛应用于多种疾病的抗凝以及预防和治疗血栓栓塞中，但是因为华法林的有效血药浓度范围狭窄，剂量偏小会降低治疗血栓形成的效果，剂量偏大则会增大出血的风险，甚至引发大出血等副作用。已知与华法林的药效学和药动学相关的基因达30余种，细胞色素2C9(CYP2C9)和微生物K环氧化物还原酶复合物（VKORC1）基因的多态性是影响华法林用量个体差异最主要的遗传因素。通过对患者的基因CYP2C9、VKORC1进行检测，得到特定位点的基因型，以基因检测结果作为中间结果的信息的方法，不属于疾病的诊断方法；以基因型的检测结果来确定华法林需求的维持剂量，就可以实现个体化用药，既可避免剂量不够造成血栓，又可防止剂量过大引起出血并发症。

目前常用的CYP2C9基因和VKORC1基因突变检测方法主要有Taqman荧光探针法。但Taqman荧光探针法灵敏度低、假阳性率高、耗时较长，通量小。

因此，需要一种新的检测CYP2C9基因和VKORC1基因突变的试剂盒及检测方法，使得对CYP2C9基因和VKORC1基因突变的检测灵敏度高、假阳性率低，且检测周期短，通量高。

发明内容

本发明的目的在于提供一种CYP2C9基因检测引物组、试剂盒及检测方法，旨在解决现有技术中CYP2C9基因检测灵敏度低、假阳性率高、周期长，通量小的技术问题。

本发明的一个目的在于提供一种基因检测引物组，用于对含待测位点的核酸片段进行特异性扩增，所述待测位点包括CYP2C9基因上的rs1799853位点、rs1057910位点，以及VKORC1基因上的rs9923231位点中的至少一种，所述引物组包括rs1799853引物组、rs1057910引物组以及rs9923231引物组中的至少一种；

所述rs1799853引物组用于特异性扩增含rs1799853位点的核酸片段，包括rs1799853上游引物SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4，以及rs1799853下游引物SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7或SEQ ID NO:8；

所述rs1057910引物组用于特异性扩增含rs1057910位点的核酸片段，包括rs1057910上游引物SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11或SEQ ID NO:12，以及rs1057910下游引物SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:15或SEQ ID NO:16；

所述rs9923231引物组用于特异性扩增含rs9923231位点的核酸片段，包括rs9923231上游引物SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:19或SEQ ID NO:20，以及rs9923231下游引物SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:23或SEQ ID NO:24。