[发明专利]快速鉴定光皮梾木种群的分子检测方法

说明书

本发明公开了一种快速鉴定光皮梾木种群的分子检测方法，所述鉴定方法是以光皮梾木的DNA作为模板，SEQ ID No:1～30作为引物对，分别进行PCR扩增，获得微卫星分子标记数据；再对微卫星分子标记数据进行统计分析，鉴定归类光皮梾木种群。本发明的快速鉴定光皮梾木种群的分子检测方法在非破坏性取样的前提下快速获得基因组信息，工作量少且效率高，同时判别准确率高达95％，具有准确、省时和省力的优势；对于物种种群的快速分子检测具有重要价值和应用前景。

技术领域

本发明属于分子生物学技术领域，更具体地，本发明涉及一种快速鉴定光皮梾木种群的分子检测方法。

背景技术

光皮梾木(Cornus wilsonianaWanger)又名光皮树、油树、狗骨木、斑皮抽水树等，属山茱萸科梾木属，是我国特有的多用途乡土木本油料树种。光皮梾木果油作为食用油已有100年历史,1981年经国家粮食部鉴定，光皮梾木油为一级食用油；2013年12月，国家卫生和计划生育委员会批准光皮梾木果实油为我国的新食品原料。动物和临床试验结果表明光皮梾木油可显著降低体内胆固醇，防治高血脂症，尤其是老年高血脂症，同时具有减肥功效。光皮梾木是一种兼有经济、生态和社会效益的重要油料树种。

但是，一般从表型特征很难区分光皮梾木的种群，尤其是在上个世纪70-80年代，曾经在一定的区域内进行过人为的广泛传播，对于收集、选择和建立基因库带来一定的难度。因此，急需解决判定种群起源的准确方法，为开展光皮梾木的育种提供必要的技术支持。

植物的基因组具有很好的稳定性，基本上不受环境影响，且取材方便。因此，通过对植株在基因组差异性的检测来追踪其起源是完全可行的。

DNA分子标记是快速鉴定生物基因组差异的重要方法之一，其中微卫星标记具有多态性高、稳定性好、操作便捷等诸多优点，通过对目标植物种群进行微卫星标记的检测，不仅可以区分在性状上存在明显差异的个体，而且能够有效判别种群水平上的相似性。

目前国内外尚无对光皮梾木种群分子快速鉴定的相关报道。

发明内容

为了克服上述现有技术的缺陷，本发明提供了一种非破坏性取样下快速鉴定光皮梾木种群的分子检测方法及其引物对，该鉴定方法准确、省时、省力。

为了实现上述发明目的，本发明采取了以下技术方案：

一种快速鉴定光皮梾木种群的分子检测方法，包括以下步骤：

(1)、以光皮梾木的DNA为模板，分别以SEQ ID No:1～2、SEQ ID No:3～4、SEQ IDNo:5～6、SEQ ID No:7～8、SEQ ID No:9～10、SEQ ID No:11～12、SEQ ID No:13～14、SEQID No:15～16、SEQ ID No:17～18、SEQ ID No:19～20、SEQ ID No:21～22、SEQ ID No:23～24、SEQ ID No:25～26、SEQ ID No:27～28、以及SEQ ID No:29～30作为引物对，进行PCR扩增，获得微卫星分子标记数据；

(2)、对上述微卫星分子标记数据进行统计分析，鉴定归类光皮梾木种群。

在其中一些实施例中，步骤(1)中所述PCR扩增的反应程序为：

步骤S1，94℃下预变性5min；

步骤S2，94℃下变性30s；

步骤S3，57℃下退火30s；

步骤S4，72℃下延伸20s；

步骤S5，将所述步骤S2至所述步骤S4重复35次，且最后一次的所述步骤S4持续10min。