[发明专利]一种花生焦斑病菌分子检测引物及其快速检测方法在审
| 申请号： | 201710130114.1 | 申请日： | 2017-03-07 |
| 公开（公告）号： | CN106702014A | 公开（公告）日： | 2017-05-24 |
| 发明（设计）人： | 陈福如;杜宜新;石妞妞;阮宏椿;甘林;杨秀娟;代玉立 | 申请（专利权）人： | 福建省农业科学院植物保护研究所 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;C12Q1/04;C12N15/11;C12R1/645 |
| 代理公司： | 福州元创专利商标代理有限公司35100 | 代理人： | 蔡学俊,林文弘 |
| 地址： | 350013 福建省福*** | 国省代码： | 福建;35 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 花生 病菌 分子 检测 引物 及其 快速 方法 | ||
1.一种花生焦斑病菌分子检测引物，其特征在于：引物的核苷酸序列为：
上游引物LCSF：5’- GAGATGTACTGCGCTCCGAA-3’；
下游引物LCSR：5’- ACTTACGTTTCCTCGGCGG-3’。
2.根据权利要求1所述花生焦斑病菌分子检测引物，其特征在于：所述上游引物LCSF和下游引物LCSR对花生焦斑病菌特异性扩增出355bp的产物。
3.一种利用权利要求1所述引物的花生焦斑病菌的快速检测方法，其特征在于：包括以下步骤：
(1)提取花生植株的DNA；
(2) 以提取的花生植株DNA为模板进行PCR扩增：PCR反应体系25μL，包含2.5μL 10×PCR buffer，2.0μL浓度为2.5mmol/L的dNTP Mixture，0.15μL浓度为5U/μL的Taq酶，10μmol/L的LCSF和LCSR各0.5μL，DNA模板1μL，加ddH2O至总体积达25μL；PCR反应条件为：94℃预变性5min；94℃变性45sec，57℃退火45sec，72℃延伸45sec，共35个循环；72℃延伸10min；
(3)上步所得的PCR产物在1.0%琼脂糖凝胶上用0.5×TBE缓冲液电泳分析，电压为4-5V/cm；根据扩增产物的大小判定检测结果，如果能特异性扩增出355bp的产物，则可判定花生植株存在花生焦斑病菌。
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