[发明专利]检测ABO血型基因型的方法和ABO血型基因座的等位基因分型标准物的模板

说明书

本发明公开了检测ABO血型基因型的方法和ABO血型基因座的等位基因分型标准物的模板。本发明所提供的方法，包括如下步骤：以待测样本的基因组DNA或总DNA为模板，采用引物组合进行PCR扩增，得到PCR扩增产物，然后确定含有哪几种等位基因，进一步确定待测样本的ABO血型基因型。引物组合由6条引物组成，核苷酸序列依次为序列表中的序列1至序列6。实验证明，采用本发明提供的方法检测ABO血型基因型，准确率为100％；采用本发明提供的重组质粒组合物作为ABO血型基因座的等位基因分型标准物的模板，可扩增获得ABO血型基因座的等位基因分型标准物，并可在多种商业试剂盒中使用。本发明具有重要的应用价值。

技术领域

本发明涉及法医学技术领域，具体涉及检测ABO血型基因型的方法和ABO血型基因座的等位基因分型标准物的模板。

背景技术

ABO血型是经典的人类遗传标记，在输血、亲子鉴定、人类学研究、法医物证检验等领域均占据重要地位。针对ABO血型，传统的血清学检验方法是对抗原或抗体进行检验，而在法医物证检验中最为常用的方法是检验抗原物质，但由于ABO血型抗原是糖脂或糖蛋白，因此检验时易受抗原活性、抗体的特异性以及微生物的污染等因素的影响。尤其针对性犯罪中的混合斑检验，传统的血清学检验方法也有着无法克服的局限性，使得无法分离女性受害人和男性嫌疑人的血型物质，只能根据受害人的血型来推测嫌疑人的血型，一旦遇到受害人血型遮蔽的情况，则无法准确推断混合斑中男性物质的血型。1985年，Gill研究组将差异裂解法和DNA指纹图技术应用于法医学检验，成功的分别提取混合斑中精子DNA和女性DNA，解决了困扰法医物证检验多年的难题，这也使DNA技术检验混合斑中精子血型成为可能。1990年，Yamamoto等人报道了ABO血型基因的核苷酸序列，准确检测到各等位基因在DNA序列上不同的SNP位点碱基的差异，这些研究证实利用ABO血型基因上SNP位点的差异进行ABO血型的基因分型将是一种非常有效的方法，特别是对于法医学实践中微量或降解的检材，但是现有的ABO血型基因SNP分型仍有一些不足，例如无法重复；虽可以重复，但在毛细管电泳平台上的峰型易出现分叉、肩峰、不对称等等现象，导致无法准确读取分型。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是如何检测ABO血型基因型。

为解决上述技术问题，本发明首先提供了引物组合。

本发明所提供的引物组合，可由引物ABO-F1、引物ABO-F2、引物ABO-F3、引物ABO-R1、引物ABO-R2和引物ABO-R3组成；

所述引物ABO-F1可为如下A1)或A2)：

A1)序列表中的序列1所示的单链DNA分子；

A2)将序列1经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列1具有相同功能的DNA分子；

所述引物ABO-F2可为如下A3)或A4)：

A3)序列表中的序列2所示的单链DNA分子；

A4)将序列2经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列2具有相同功能的DNA分子；

所述引物ABO-F3可为如下A5)或A6)：

A5)序列表中的序列3所示的单链DNA分子；

A6)将序列3经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列3具有相同功能的DNA分子；

所述引物ABO-R1可为如下A7)或A8)：

A7)序列表中的序列4所示的单链DNA分子；

A8)将序列4经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列4具有相同功能的DNA分子；

所述引物ABO-R2可为如下A9)或A10)：