[发明专利]一种标记植物花粉微丝微管细胞骨架的方法及其试剂盒

权利要求书

1.用于标记植物花粉微丝微管细胞骨架的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括花粉固定液试剂A，花粉洗涤液试剂B，花粉微丝染料试剂组合C，以及花粉微管染料试剂组合D；

其中，所述试剂A由多聚甲醛、EGTA、PIPES、MgCl₂和蔗糖组成；所述试剂B由Tris-HCl、NaCl和蔗糖组成；所述试剂组合C包括0.1～0.15％NP-40、0.06～0.08％NP-40和Alex-561-phalloidin染色液；所述试剂组合D包括Cellulose和PectolyaseY-23混合液、0.1～0.15％NP-40、0.06～0.08％NP-40、甘氨酸溶液、一抗anti-a-Tubulin、二抗FITC-anti-mouse-IgG以及Tris-HCl、NaCl和甘氨酸的混合液；

所述植物为苹果；

所述试剂A中多聚甲醛的质量体积比为5～6％、EGTA的浓度为2～3mM、PIPES的浓度为50～60mM、MgCl₂的浓度为2～3mM、蔗糖的质量体积比为10～15％；

所述试剂B中Tris-HCl的浓度为50～60mM，pH7.0，NaCl的浓度为200～250mM，蔗糖的质量体积比为10～15％；

所述试剂组合C中，0.1～0.15％NP-40用花粉萌发液配制；0.06～0.08％NP-40用TBSS配制；Alex-561-phalloidin染色液中Alex-561-phalloidin的浓度为150nM，pH7.0的Tris-HCl浓度为50～60mM，NaCl的浓度为200～250mM，蔗糖的质量体积比为10～15％；

其中，所述花粉萌发液的配方为：葡萄糖0.08～0.1g/ml、CaCl₂0.25～0.3mg/ml和硼酸0.08～0.1mg/ml；

所述TBSS由pH7.0 60mM的Tris-HCl，250mM NaCl和质量体积比为15％的蔗糖组成；

所述试剂组合D中，Cellulose和PectolyaseY-23混合液中Cellulose的浓度为1.0～1.5％，PectolyaseY-23的浓度为0.1～0.15％；0.1～0.15％和0.06～0.08％的NP-40用TBSS配制；甘氨酸溶液的浓度为50～60mM；一抗anti-a-Tubulin以及二抗FITC-anti-mouse-IgG的浓度配比分别为1:300-400；Tris-HCl、NaCl和甘氨酸的混合液中Tris-HCl的浓度为5～60mM，pH7.0，NaCl的浓度为200～250mM，甘氨酸的浓度为50～60mM；

其中，所述TBSS由pH7.0 60mM的Tris-HCl，250mM NaCl和质量体积比为15％的蔗糖组成。