[发明专利]一种拟穴青蟹抗病因子SpALF6单核苷酸突变体及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种拟穴青蟹抗病因子SpALF6单核苷酸突变体SpALF6-M，其特征在于，其全长核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示；所述的拟穴青蟹抗病因子SpALF6单核苷酸突变体SpALF6-M的全长氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示。

2.一种如权利要求1所述的拟穴青蟹抗病因子SpALF6单核苷酸突变体SpALF6-M的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(a)根据氨基酸序列SEQ ID NO:4，设计引物通过融合PCR扩增含有单核苷酸突变位点的成熟肽对应核酸序列；

(b)构建青蟹抗病因子SpALF6单核苷酸突变体的重组表达载体pET30a/SpALF6-M；

(c)将步骤(b)所获得重组表达载体导入宿主细胞Rosetta(DE3)，诱导宿主细胞表达，经亲和层析纯化获得SpALF6-M。

3.根据权利要求2所述的拟穴青蟹抗病因子SpALF6单核苷酸突变体SpALF6-M的制备方法，其特征在于，所述的步骤(a)中以引物SpALF6EF和SpALF6MR配对，引物SpALF6EF和SpALF6MR的核苷酸序列如SEQ ID NO:6和SEQ ID NO:8所示，利用SpALF6的cDNA为模板，通过PCR获取含突变位点的上游核酸片段；以引物SpALF6MF和SpALF6ER配对，引物SpALF6MF和SpALF6ER的核苷酸序列如SEQ ID NO:9和SEQ ID NO:7所示，利用SpALF6的cDNA为模板，通过PCR获取含突变位点的下游核酸片段；各取上述两个PCR产物0.5μL进行混合，作为PCR模板，以SpALF6EF和SpALF6ER为配对引物，通过PCR获取SpALF6-M成熟肽区对应的DNA序列；最后与SpALF6全长序列对比，进行补充拼接即可获取SpALF6-M全长序列。

4.一种如权利要求1所述的拟穴青蟹抗病因子SpALF6单核苷酸突变体SpALF6-M在制备抗菌药物中的应用，所述的抗菌药物为抗真菌药物或抗病原性细菌的药物；所述的真菌为酵母菌、白色念珠球菌；所述的病原性细菌为溶藻弧菌、副溶血弧菌、哈维氏弧菌、嗜水气单胞菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌。

5.一种如权利要求1所述的拟穴青蟹抗病因子SpALF6单核苷酸突变体SpALF6-M在制备动物抗病原微生物饲料添加剂中的应用；所述的病原微生物为真菌或病原性细菌；所述的真菌为酵母菌、白色念珠球菌；所述的病原性细菌为溶藻弧菌、副溶血弧菌、哈维氏弧菌、嗜水气单胞菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌。