[发明专利]一种在体内获得并纯化大量目的LncRNA的方法有效
| 申请号： | 201710040358.0 | 申请日： | 2017-01-19 |
| 公开（公告）号： | CN106591367B | 公开（公告）日： | 2019-05-07 |
| 发明（设计）人： | 肖建如;周旺;李博;陈天睿;魏海峰;王静;严望军;李佳林 | 申请（专利权）人： | 中国人民解放军第二军医大学 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85;C12N15/113 |
| 代理公司： | 上海卓阳知识产权代理事务所(普通合伙) 31262 | 代理人： | 周春洪 |
| 地址： | 200433 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 体内 获得 纯化 大量 目的 lncrna 方法 | ||
1.一种在体内获得并纯化目的LncRNA的方法，其特征在于，包括以下步骤：
a)将带有标签蛋白的PPR蛋白的过表达载体与LncRNA过表达载体共转染工具细胞，所述的LncRNA过表达载体的LncRNA基因序列下游带有PPR蛋白的特异性识别碱基序列；
b)培养工具细胞；
c)裂解工具细胞，富集和纯化PPR蛋白，进而间接地富集和纯化得到LncRNA。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的PPR蛋白的氨基酸序列如SEQ IDNO.1所示。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述的PPR蛋白的基因序列如SEQ ID NO.3所示。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述的PPR蛋白过表达载体的构建方法为：将PPR蛋白的基因序列插入到pcDNA3.1载体的HindIII和EcoRI位点之间，并于PPR蛋白的基因序列上游插入标签蛋白的编码序列。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的PPR蛋白的特异性识别碱基序列如SEQ ID NO.2所示。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的LncRNA过表达载体选自下列中的一种：
a)pcDNA3.1-H19：将SEQ ID NO.4所示的H19的基因序列插入到pcDNA3.1载体的HindIII和EcoRI位点之间；
b)pcDNA3.1-HOTAIR：将SEQ ID NO.5所示的HOTAIR的基因序列插入到pcDNA3.1载体的HindIII和EcoRI位点之间；
c)pcDNA3.1-BANCR：将SEQ ID NO.6所示的BANCR的基因序列插入到pcDNA3.1载体的HindIII和EcoRI位点之间。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的工具细胞是HEK-293T细胞。
8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的标签蛋白是Flag标签。
9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，步骤c)是通过标签蛋白的抗体富集PPR蛋白。
10.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤c)中的每个具体操作均使用RNA酶抑制剂。
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