[发明专利]血清复合靶核酸适配体筛选方法在审
| 申请号： | 201710009628.1 | 申请日： | 2017-01-06 |
| 公开（公告）号： | CN106872680A | 公开（公告）日： | 2017-06-20 |
| 发明（设计）人： | 栗坤;李健;石明 | 申请（专利权）人： | 秦皇岛拜恩发生物技术有限公司 |
| 主分类号： | G01N33/53 | 分类号： | G01N33/53;G01N33/68;C12N15/10 |
| 代理公司： | 哈尔滨市邦杰专利代理事务所(普通合伙)23212 | 代理人： | 吴江东 |
| 地址： | 066000 河北省秦*** | 国省代码： | 河北;13 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 血清 复合 核酸 适配体 筛选 方法 | ||
1.一种血清复合靶核酸适配体筛选方法，其特征是: 本筛选方法包括四步，第一步将待筛选的血清复合靶与琼脂磁珠偶联，形成琼脂磁珠-血清复合物，37 ℃孵育6小时；第二步将随机寡核苷酸文库进行加热变性处理，与琼脂磁珠-血清复合物相结合，用缓冲液冲洗掉未结合和结合力弱的靶标分子ssDNA，获得与血清复合物结合的核酸适配体分子；第三步对血清复合物的核酸适配体分子通过q-PCR扩增，再用PCR扩增产物制备得到次级ssDNA库，通过q-PCR动态检测与血清复合物结合的核酸适配体；第四步重复第二步所述的，筛选得到高特异性、强亲和力的血清复合物核酸适配体。
2.根据权利要求1所述的血清复合靶核酸适配体筛选方法，其特征是: 所述的第二步随机寡核苷酸文库是将5nmol 随机寡核苷酸溶于4mL结合缓冲液中，所述的结合缓冲液是磷酸缓冲液和5mol／L MgCl2组成的溶液。
3.根据权利要求2所述的血清复合靶核酸适配体筛选方法，其特征是: 磷酸缓冲液和5mol／L MgCl2比例为20：1。
4.根据权利要求1所述的血清复合靶核酸适配体筛选方法，其特征是: 所述的第二步的靶标分子ssDNA是与琼脂磁珠-血清复合物结合的ssDNA。
5.根据权利要求1所述的血清复合靶核酸适配体筛选方法，其特征是: 所述的第三步制备次级ssDNA库包括如下步骤：将q-PCR扩增后的产物与链霉亲和素磁珠37℃孵育6小时，用1%tween+磷酸缓冲液在80℃水浴3次，然后加入2ml结合缓冲液，变性并收集上清液，4℃保存，即制备得到次级ssDNA库。
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