[发明专利]一种荧光探针PMPA及其制备方法与应用

权利要求书

1.一种荧光探针PMPA，特征在于，其结构式为：

2.如权利要求1所述的一种荧光探针PMPA的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)按摩尔比3:3-5将1-乙酰芘、6-甲氧基-吡啶-3-甲醛溶解于无水乙醇中，并且在室温下搅拌至反应物完全溶解，呈淡黄色溶液；

(2)然后加入氢氧化钠溶液,常温下继续搅拌32小时，TLC跟踪反应；

(3)最后加入无水乙醇，生成黄色的絮状沉淀；静置，抽滤，干燥，即得到黄色固体PMPA。

3.一种定量荧光检测酸性条件下pH的方法，其特征在于，步骤为：

(1)用DMSO配制1mM的如权利要求1所述的荧光探针PMPA储备液；

(2)将2.0mL蒸馏水以及30.0μL荧光探针PMPA储备液加入荧光比色皿中，在荧光分光光度仪上检测，随着待测样的加入，527nm处的荧光强度逐渐减弱，417nm处的荧光强度逐渐增强；

(3)以pH为横坐标，以相对荧光强度I_417nm/I_527nm为纵坐标绘制图并进行Sigmoidal拟合，求得pK_a＝2.70；通过线性拟合得到荧光探针的最佳线性响应范围为pH1.26-3.97，回归方程为：I_417nm/I_527nm＝-4.64×pH+19.87，线性相关系数为R²＝0.9906。

4.一种定量荧光检测碱性条件下pH的方法，其特征在于，步骤为：

(1)用DMSO配制1mM的如权利要求1所述的荧光探针PMPA储备液；

(2)将2.0mL蒸馏水以及30.0μL荧光探针PMPA储备液加入荧光比色皿中，在荧光分光光度仪上检测，随着待测样的加入，527nm处的荧光强度逐渐减弱，460nm处的荧光强度逐渐增强；

(3)以pH为横坐标，以相对荧光强度I_527nm/I_460nm为纵坐标绘制图并进行Sigmoidal拟合，求得pK_a＝9.32；通过线性拟合得到荧光探针的最佳线性响应范围为pH8.50-10.35，回归方程为：I_527nm/I_460nm＝-1.15×pH+12.46，线性相关系数为R²＝0.9904。

5.一种定量荧光检测HSO₃^-的方法，其特征在于，步骤为:

(1)用DMSO配制1mM的如权利要求1所述的荧光探针PMPA储备液；

(2)将2.0mL pH＝4.00的PBS缓冲溶液以及30.0μL荧光探针PMPA储备液加入荧光比色皿中，在荧光分光光度仪上检测，随着待测样的加入，527nm处的荧光强度逐渐减弱；

(3)以HSO₃^-浓度为横坐标，以相对荧光强度△F为纵坐标绘制图，得到HSO₃^-浓度的工作曲线，线性回归方程为：△F＝63.53[HSO₃^-]+21.69，HSO₃^-浓度的单位为10^-6mol/L；线性相关系数为R²＝0.9943，最佳线性响应范围为0μM-6.5μM，检出限(LOD)为0.32μM。

6.如权利要求1所述的一种荧光探针PMPA在动物或微生物样品中pH检测中的应用。

7.如权利要求1所述的一种荧光探针PMPA在动物或微生物样品中HSO₃^-检测中的应用。

8.如权利要求1所述的一种荧光探针PMPA在动物或微生物细胞成像中的应用。