[发明专利]一种利拉鲁肽的制备方法

说明书

本发明公开了一种利拉鲁肽的制备方法，属于医药技术领域。本发明方法包括如下步骤：1)固相合成利拉鲁肽的4个肽片段。其中肽片段1为利拉鲁肽主链序列中的第1‑9位氨基酸；肽片段2为利拉鲁肽主链序列中的第10‑14位氨基酸；肽片段3为利拉鲁肽主链序列中的第15‑23位氨基酸；肽片段4为利拉鲁肽主链序列中的第24‑31位氨基酸。2)将各肽片段逐步偶联，得到全保护的利拉鲁肽主链肽。3)脱除第20位赖氨酸的保护基，并完成侧链的连接，得到全保护的利拉鲁肽肽树脂。4)经裂解、纯化、冻干，得到利拉鲁肽。该制备方法生产效率高，工艺稳定，产品纯度高、收率高，适合工业化生产。

技术领域

本发明涉及一种利拉鲁肽的制备方法，属于医药技术领域。

背景技术

利拉鲁肽由诺和诺德公司研制，是一种人胰高糖素样多肽-1(GLP-1)的类似物，与人天然GLP-1同源性达97％，具有GLP-1受体激动作用。具有降血糖、减轻体质量、促进胰岛细胞再生及保护心血管系统等多重作用，可与其他抗糖尿病药物联用治疗II型糖尿病。利拉鲁肽历经10年研发，于2009年7月和2010年1月分别在欧盟和美国获准上市，并于2011年3月在中国上市。诺和诺德基于其开发的独特的脂肪酸链修饰技术平台，通过将天然GLP-1分子的34位赖氨酸取代为精氨酸、且在26位赖氨酸上增加一个16碳脂肪酸侧链而获得利拉鲁肽。由于该脂肪酸侧链的存在，致使该药与血浆白蛋白的可逆性非共价键结合增加，这不仅使得该药能暂时躲避二肽基肽酶-4(DPP-4)的降解作用，还使得该药因与白蛋白形成可逆的复合体而缓慢释放，导致其体内吸收与分布过程减缓，半衰期较天然GLP-1明显延长，给药频率达到一天一次。最新LEADER研究显示，利拉鲁肽使得心血管死亡风险降低22％，是第一种有心血管获益的GLP-1药物。

利拉鲁肽的分子式为C₁₇₂H₂₆₅N₄₃O₅₁，分子量为3751.20，CAS号为204656-20-2，其结构如下所示：

NH₂-His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys(N-ε-(N^α-Palmitoyl-γ-Glutamyl))-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Arg-Gly-Arg-Gly-COOH

诺和诺德研制的生产工艺为通过基因重组技术，利用酵母菌发酵获得利拉鲁肽。专利CN104592381公布了一种通过基因重组技术，以大肠杆菌为载体，发酵获得利拉鲁肽的工艺。总体来说，基因重组的技术难度较大，工艺复杂，生产成本较高。且由于发酵获得的GLP-1(7-37)-OH的侧链处于未保护状态，在连接侧链的反应过程中易产生杂质，从而导致纯化更加困难，工艺更加复杂。

随着固相合成法制备多肽技术的成熟，越来越多的利拉鲁肽合成工艺被开发出来。CN102286092、CN103145828和CN103980358等专利报道了利用Fmoc保护策略，逐步偶联的固相合成方法制备利拉鲁肽。由于利拉鲁肽序列中有15个疏水性氨基酸，在偶联过程中树脂的收缩较为严重，易产生缺失肽，导致收率降低。同时粗肽中与产品性质相近的杂质较多，纯化非常困难。因此，在合成过程中控制杂质的产生，减少产品纯化的次数，提供一种收率高、周期短的利拉鲁肽制备方法具有重要的现实意义。

发明内容

为解决现有技术的不足，本发明提供一种利拉鲁肽的制备方法。该方法为片段缩合法，具有收率较高、合成周期短、稳定性好等优点，适于大规模的工业生产。

本发明的目的在于提供一种利拉鲁肽的制备方法，该方法包括如下步骤：