[发明专利]一种基于扩增矫正的数字PCR检测方法

权利要求书

1.一种基于扩增矫正的数字PCR检测方法，其特征在于，所述方法通过如下步骤实现：

(1)提取待检测者的全血基因组作为血样本模板，然后确定血样本模板的一个单拷贝基因作为待测基因，再确定血样本模板的另一个单拷贝基因作为参比基因，制备两个相同且等量的第一血样本模板和第二血样本模板；

(2)设计合成包含待测基因和参比基因的序列作为载体模板，且载体模板上的待测基因数量等于参比基因的数量，制备两个相同且等量的第一载体模板和第二载体模板；

(3)配置含有第一血样本模板的第一数字PCR反应混合液分散至第一芯片的微反应孔中，第一数字PCR反应混合液包括2×Mix、待测基因引物、第一血样本模板及对应的探针、水、第一载体模板及对应的探针；

(4)配置含有第二血样本模板的第二数字PCR反应混合液分散至第二芯片的微反应孔中作为内参，第二数字PCR反应混合液包括2×Mix、参比基因引物、第二血样本模板及对应的探针、水、第二载体模板及对应的探针；

(5)将第一芯片和第二芯片放在同一反应条件中进行PCR扩增并通过荧光信号读取值，第一芯片中得到待测基因的第一血样本模板拷贝数浓度C1和第一载体模板拷贝数浓度C2，第二芯片中得到参比基因的第二血样本模板拷贝数浓度C3和第二载体模板拷贝数浓度C4；

(6)利用第一芯片中待测基因的第一血样本模板拷贝数浓度C1和第二芯片中参比基因的第二血样本模板拷贝数浓度C3的比值约等于第一芯片中第一载体模板拷贝数浓度C2和第二芯片中第二载体模板拷贝数浓度C4的比值，即约等于1的原理，得出C1矫正后的值为C3×C2÷C4。

2.根据权利要求1所述的基于扩增矫正的数字PCR检测方法，其特征在于所述待测基因为单拷贝致病基因。

3.根据权利要求1所述的基于扩增矫正的数字PCR检测方法，其特征在于所述载体模板是带有待测基因和参比基因的质粒或者DNA片段。