[发明专利]一种桑黄工厂化液体发酵过程中酶活规律的测定方法

说明书

本发明特别涉及一种桑黄工厂化液体发酵过程中酶活规律的测定方法。包括：配制培养基；装罐；灭菌；关闭搅拌，改为直接进蒸汽升温至119℃‑124℃，压力0.1±0.05Mpa，保温灭菌；接种；培养；取样对培养基中的多种酶进行测定。本发明原料选取方便，成本低，利用研究所得配方可以获得桑黄菌丝体及胞外活性物质的高产。菌丝体产量达到4.6217g/100mL。淀粉酶、羧甲基纤维素酶、半纤维素酶在第7天达到酶活高峰；果胶酶在第6天达到酶活高峰；漆酶、愈创木酚酶在第2天达到酶活高峰；邻苯二酚氧化酶在第10天和15天分别产生一个酶活高峰。这些规律，对于工厂化液体培养时适时补充合适的营养成分具有较高的指导意义。

（一）技术领域

本发明涉及桑黄，特别涉及一种桑黄工厂化液体发酵过程中酶活规律的测定方法。

（二）背景技术

药用真菌桑黄具有抗癌、抗氧化、增强免疫调节、抗炎、降血脂和抗病毒等作用 ，在传统中药中，其被用于治疗伤口、腹痛和淋病。最近的研究强调了其抗癌和肝脏保护功能。其含有三萜、黄酮、多糖等活性成分。

当前，桑黄产品大部分依赖于桑黄子实体，桑黄子实体生长对环境的依赖性很高，生长周期长，产量不稳定。利用液体培养可以较容易地对各种生长影响因素进行控制和优化，获得稳定高产。

本研究旨在利用成本较低的农产品下脚料和矿物质成分，对它们进行适宜的配比，利用合适的方法进行煮制，来获得桑黄液体培养产物（菌丝体及活性物质产量）的高产。在进行液体培养的过程中进行酶活的跟踪测定，了解多种酶活的产生规律，有研究报道的桑黄酶活产生规律，是基于少量实验室液体培养基培养的前提下获得的，该规律是在工厂发酵罐中进行小试时获得的，更具有生产实用性。该规律的把握可以有效指导控制培养基成分的灵活添加，对于桑黄的扩大生产及工业化生产具有一定的指导意义。

（三）发明内容

本发明为了弥补现有技术的不足，为了获得稳定的液体发酵高产，同时降低成本，本专利进行了桑黄液体发酵过程中酶活规律的研究。

本发明是通过如下技术方案实现的：

一种桑黄培养过程中酶的测定方法，其特征在于：包括以下步骤：

（1）配制培养基：

培养基由以下重量的原料制成：麦麸6-8%，玉米粉2-4%，蛋白胨1-3%，MgSO₄·7H₂O0.05-0.15%，KH₂PO₄ 0.10-0.15%，K₂HPO₄·3H₂O 0.02-0.04%，其余为水，

配制方法：麦麸放入足量的水中，煮沸45-55min，四层纱布过滤，向滤液中依次加入玉米粉、蛋白胨、MgSO₄·7H₂O、KH₂PO₄和K₂HPO₄·3H₂O ，调pH值为6，配制6L培养基；

（2）装罐：将培养基装入10L的发酵罐；

（3）灭菌：在搅拌状态下，夹层蒸汽加热到105-115℃；关闭搅拌，改为直接进蒸汽升温至119℃—124℃，压力0.1±0.05Mpa，保温灭菌；

（4）接种：火焰圈保护接种，向灭菌后的培养基中接入处于迅速生长期的培养8d的桑黄液体菌种；

（5）培养：T为28±0.5℃；罐压为0.05±0.005Mpa；空气流量：0-92h，0.20m³/h,93-358h,0.30m³/h，359-422h，0.20m³/h阶段性调节；搅拌：0-62h，20Hz，63-160h，30Hz，161-332h，20Hz，333-422h，10Hz，

取样对培养基中的多种酶活进行测定。