[发明专利]一种桑黄工厂化液体发酵过程中酶活规律的测定方法

权利要求书

1.一种桑黄工厂化液体发酵过程中酶活规律的测定方法，其特征在于：包括以下步骤：

（1）配制培养基：

培养基由以下重量的原料制成：麦麸6-8%，玉米粉2-4%，蛋白胨1-3%，MgSO₄·7H₂O0.05-0.15%，KH₂PO₄ 0.10-0.15%，K₂HPO₄·3H₂O0.02-0.04%，其余为水，

配制方法：麦麸放入足量的水中，煮沸45-55min，四层纱布过滤，向滤液中依次加入玉米粉、蛋白胨、MgSO₄·7H₂O、KH₂PO₄和K₂HPO₄·3H₂O ，调pH值为6，配制6L培养基；

（2）装罐：将培养基装入10L的发酵罐；

（3）灭菌：在搅拌状态下，夹层蒸汽加热到105-115℃；关闭搅拌，改为直接进蒸汽升温至119℃—124℃，压力0.1±0.05Mpa，保温灭菌；

（4）接种：火焰圈保护接种，向灭菌后的培养基中接入处于迅速生长期的培养8d的桑黄液体菌种；

（5）培养：T为28±0.5℃；罐压为0.05±0.005Mpa；空气流量：0-92h，0.20m³/h,93-358h,0.30m³/h，359-422h，0.20m³/h阶段性调节；搅拌：0-62h，20Hz，63-160h，30Hz，161-332h，20Hz，333-422h，10Hz，

取样分别对培养液的淀粉酶、羧甲基纤维素酶、半纤维素酶、果胶酶、漆酶、邻苯二酚氧化酶、愈创木酚酶活性进行测定，测定方法如下：

淀粉酶活性测定：可溶性淀粉溶液中加入粗酶液，32-45℃水浴准确保温，取出后加入配制的DNS试剂，沸水浴加热，取出冷却后加入蒸馏水，混匀，通过紫外可见分光光度计测520nm处的OD值；

羧甲基纤维素酶活性测定：羧甲基纤维素钠溶液中加入粗酶液，42-55℃水浴保温，取出后加入配制的DNS试剂，沸水浴加热，取出冷却后加入蒸馏水，混匀，紫外可见分光光度计测520nm处的OD值；

半纤维素酶活性测定：小麦半纤维素溶液中加入粗酶液，42-55℃水浴保温，取出后加入配制的DNS试剂,沸水浴加热，取出冷却后加入蒸馏水，混匀，紫外可见分光光度计测520nm处的OD值；

果胶酶活性测定：在果胶溶液中加入粗酶液，42-55℃水浴保温，取出后加入配制的DNS试剂,沸水浴加热，取出冷却后加入蒸馏水，混匀，紫外可见分光光度计测520nm处的OD值；

漆酶活性测定：邻联甲苯胺溶液、醋酸盐缓冲液和粗酶液混合得反应液，20-35℃保温后，用紫外分光光度计于600nm处测光密度值；

邻苯二酚氧化酶活性测定：邻苯二酚溶液、磷酸盐缓冲液、粗酶液混合得反应液，反应液20-35℃保温后，用紫外分光光度计于400nm处测光密度值；

愈创木酚酶活性测定：愈创木酚溶液、醋酸盐缓冲液和粗酶液混合得反应液，反应液20-35℃保温后，用紫外分光光度计于490nm处测光密度值。