[发明专利]一种基于化学标记技术的蛋白质同位素稀释串联质谱检测方法

权利要求书

1.一种基于化学标记技术的蛋白质同位素稀释串联质谱检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)采用化学标签A对待测样品进行标记，得到标记样品；

(2)采用带同位素标记的化学标签iso-A对内标物进行标记，得到标记内标物；

(3)将所述标记样品与标记内标物按照预设比例混匀，得到初样；

(4)对初样进行预处理，得到进样样品；

(5)将所述进样样品进行检测。

2.如权利要求1所述的基于化学标记技术的蛋白质同位素稀释串联质谱检测方法，其特征在于，所述步骤(1)中采用化学标签A对待测样品进行标记之前，将待测样品进行蛋白质变性处理。

3.如权利要求2所述的基于化学标记技术的蛋白质同位素稀释串联质谱检测方法，其特征在于，所述步骤(1)中蛋白质变性处理方法包括有机试剂变性处理方法、无机盐变性处理方法、酸处理变性处理方法、碱处理变性处理方法、破坏氢键变性处理方法、破坏非共价键变性处理方法、还原二硫键变性处理方法、加热变性处理方法、超声处理变性处理方法、加入表面活性剂变性处理方法中的一种或一种以上变性处理方法的组合。

4.如权利要求1所述的基于化学标记技术的蛋白质同位素稀释串联质谱检测方法，其特征在于，所述标记内标物和标记样品之间的分子量大于等于4Da。

5.如权利要求1所述的基于化学标记技术的蛋白质同位素稀释串联质谱检测方法，其特征在于，所述化学标签A为甲醛和氰基硼氢化物组成的标记组份、碘代乙酰胺、1，2-环己二酮、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐、甘氨酰胺、碘代乙酰胺、焦碳酸二乙酯、琥珀酰酐、2-羟基-5-硝基苄溴以及四硝基甲烷中的至少一种组份。

6.如权利要求1或5所述的基于化学标记技术的蛋白质同位素稀释串联质谱检测方法，其特征在于，所述的标记位点为精氨酸、组氨酸、赖氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、半胱氨酸、脯氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、酪氨酸以及缬氨酸中至少一种氨基酸的侧链。

7.如权利要求1所述的基于化学标记技术的蛋白质同位素稀释串联质谱检测方法，其特征在于，所述步骤(4)中的预处理方法包括二硫键还原、半胱氨酸烷基化、非共价键断裂、翻译后修饰消除、蛋白酶解反应、蛋白质净化、多肽净化、稀释处理中的一种或者一种以上预处理方法的组合。

8.如权利要求7所述的蛋白质酶解反应方法，其特征在于，所述步骤(4)中的预处理方法包括蛋白酶解反应，所述蛋白酶解反应中的蛋白酶包括碱性胰蛋白酶、糜蛋白酶、胃蛋白酶、嗜热菌蛋白酶、弹性蛋白酶、蛋白质酶K、Rhizopuspepsin、CysN、LysC、LysN、ArgC、ArgN、AspC、AspN、GluC、TyrC、ProC、ProN、V8蛋白酶中的一种或者一种以上。

9.如权利要求1所述的基于化学标记技术的蛋白质同位素稀释串联质谱检测方法，其特征在于，所述步骤(5)中的检测方法为液相色谱串联质谱法或者原位质谱法。

10.如权利要求1所述的基于化学标记技术的蛋白质同位素稀释串联质谱检测方法，其特征在于，所述内标物为蛋白质纯品、蛋白质纯品混合物、蛋白质纯品与待测样品基质混合得到的混合物，或蛋白质纯品混合物与待测样品基质混合得到的混合物。