[发明专利]一种核苷酸基金属仿生漆酶

说明书

本发明涉及一种核苷酸基金属仿生漆酶，具体涉及一种用于酚类物质和肾上腺素类化合物检测的核苷酸基金属仿生漆酶，该金属仿生漆酶为Cu²⁺与核苷酸形成的纳米网状配位复合物，该复合物以Cu²⁺为催化中心，以核苷酸为有机骨架，具有类漆酶活性。该金属仿生漆酶具有较高活性，能够多次重复利用，并且稳定性大大优于生物漆酶，能够代替生物漆酶应用于酚胺类物质的检测。该金属仿生酶还能够直接催化氧化肾上腺素类化合物生成显色物质，从而实现对肾上腺素类化合物的检测。应用该金属仿生漆酶检测酚胺类物质及肾上腺素类化合物的方法简便易行且灵敏度较高，在生化检测领域具有较好的应用前景。

技术领域

本发明涉及一种核苷酸基金属仿生漆酶，具体涉及一种用于酚类物质和肾上腺素类化合物检测的核苷酸基金属仿生漆酶。

背景技术

漆酶(苯二酚氧化酶，EC 1.10.3.2)是一类含铜多酚氧化酶，可催化氧化多种酚类和非酚类的底物，如苯酚、氯酚、邻苯二胺等。漆酶作为一种绿色、环保生物催化剂，催化氧化的底物十分广泛，在废水处理、生物漂白、芳香化合物转化、生物传感器构建等方面领域有广泛的应用前景。但是，天然漆酶不仅价格昂贵，稳定性差，活性在使用过程中易受环境条件变化影响，另外酶无法回收进行重复使用，从而限制了天然漆酶在实际生活中的应用。因此，需要一种具有高稳定性和可循环利用的模拟酶来克服天然酶在应用过程中的诸多问题。

随着工业的发展，在改善人类生活的同时，也对环境带来巨大的的危害。环境中的酚污染主要指酚类化合物对水体的污染，酚类化合物是指苯及其稠环的羟基衍生物。含酚废水是当今世界上危害大、污染范围广的工业废水之一，是环境中水污染的重要来源。目前，我国测定工业废水中挥发酚的标准方法是以K₃(Fe(CN)₆)作氧化剂，4-氨基安替吡啉作显色剂的紫外分光光度法，但是该法所生成的络合物在水溶液中很不稳定，而且氧化剂对人体有毒害，因此需要一种新的氧化剂取代K₃(Fe(CN)₆)作氧化剂，应用于水体的酚类物质检测。

发明内容

本发明的目的在于提供一种核苷酸基金属仿生漆酶，以解决上述问题。

本发明的实施例提供了一种核苷酸基金属仿生漆酶，为Cu²⁺与核苷酸形成的纳米网状配位复合物，复合物以Cu²⁺为催化中心，以核苷酸为有机骨架，具有类漆酶活性。

进一步，该核苷酸基金属仿生漆酶用于检测酚类化合物，酚类化合物包括苯酚、邻苯二酚、对苯二酚、萘酚和2,4-二氯苯酚。

进一步，检测酚类化合物的方法包括:将核苷酸基金属仿生漆酶与显色剂4-氨基安替吡啉和酚类化合物的混合溶液反应30-120min，溶液反应后离心，上清液在510nm下测定吸光度。

进一步，核苷酸基金属仿生漆酶的浓度为0.025-0.5mg/ml,混合溶液中酚类化合物的浓度为0.005-0.1mg/mL，混合溶液中显色剂4-氨基安替吡啉的浓度为0.1-0.5mg/mL，混合溶液的pH为2-10，混合溶液的盐浓度为0-1000mmol/L。

进一步，该盐包括NaCl,KCl,CaCl₂,MgCl₂。

进一步，该核苷酸基金属仿生漆酶还用于检测肾上腺素类化合物，肾上腺素类化合物包括肾上腺素和去甲肾上腺素。

进一步，检测肾上腺素类化合物的方法包括:将核苷酸基金属仿生漆酶与肾上腺素类化合物和缓冲液混合反应15-120min，溶液反应后离心，在485nm下测定上清液的吸光度。

进一步，核苷酸基金属仿生漆酶的浓度为0.025-0.5mg/ml,肾上腺素类化合物的浓度为0.005-0.1mg/mL，缓冲液为MES缓冲液，缓冲液的浓度为30-100mmol/L，缓冲液的pH为6.8-7.4。