[发明专利]一种核苷酸基金属仿生漆酶有效
申请号: | 201611197305.1 | 申请日: | 2016-12-22 |
公开(公告)号: | CN106866762B | 公开(公告)日: | 2019-10-18 |
发明(设计)人: | 梁浩;林菲菲;袁其朋;张育眉;张斯琪 | 申请(专利权)人: | 北京化工大学 |
主分类号: | C07H19/20 | 分类号: | C07H19/20;G01N21/33 |
代理公司: | 无锡市朗高知识产权代理有限公司 32262 | 代理人: | 赵华 |
地址: | 100029 *** | 国省代码: | 北京;11 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 漆酶 肾上腺素类 核苷酸 基金属 金属 酚胺 检测 应用 核苷酸形成 化合物检测 配位复合物 催化氧化 催化中心 多次重复 酚类物质 漆酶活性 生化检测 显色物质 有机骨架 仿生酶 复合物 高活性 灵敏度 | ||
1.一种核苷酸基金属仿生漆酶,其特征在于,为Cu2+与核苷酸形成的纳米网状配位复合物,所述复合物以Cu2+为催化中心,以核苷酸为有机骨架;所述复合物的制备方法包括如下步骤:
1)分别配制可溶性铜盐和可溶性核苷酸溶液;其中,所述可溶性铜盐的浓度为50-250mmol/L,所述可溶性核苷酸溶液的浓度为5-25mmol/L;所述可溶性铜盐为硫酸铜、氯化铜或硝酸铜;所述可溶性核苷酸为5’-鸟嘌呤核苷单磷酸二钠盐及其二磷酸和三磷酸钠盐、5’-腺嘌呤核苷单磷酸二钠盐及其二磷酸和三磷酸钠盐、5’-胞嘧啶核苷单磷酸二钠盐及其二磷酸和三磷酸钠盐;
2)将步骤1)配制的可溶性铜盐和可溶性核苷酸溶液在常温下混合,静置0.5-3h,离心得到蓝色沉淀,即所述核苷酸基金属仿生漆酶;其中,离心转速为10000-12000rpm,时间为5-10min;
配制所述可溶性核苷酸溶液所采用的溶剂为水溶液、HEPES缓冲液或MES缓冲液;所述HEPES缓冲液的浓度为10mmol/L,pH为6.8-8.0;所述MES缓冲液的浓度为30mmol/L,pH为5.5-6.8。
2.根据权利要求1所述的一种核苷酸基金属仿生漆酶,其特征在于,用于检测酚类化合物,所述酚类化合物选自苯酚、邻苯二酚、对苯二酚、萘酚和2,4-二氯苯酚。
3.根据权利要求2所述的一种核苷酸基金属仿生漆酶,其特征在于,所述检测酚类化合物的方法包括:将所述核苷酸基金属仿生漆酶与显色剂4-氨基安替吡啉和酚类化合物的混合溶液反应30-120min,溶液反应后离心,上清液在510nm下测定吸光度。
4.根据权利要求3所述的一种核苷酸基金属仿生漆酶,其特征在于,所述核苷酸基金属仿生漆酶的浓度为0.025-0.5mg/ml,所述混合溶液中酚类化合物的浓度为0.005-0.1mg/mL,所述混合溶液中显色剂4-氨基安替吡啉的浓度为0.1-0.5mg/mL,所述混合溶液的pH为2-10,所述混合溶液的盐浓度为0-1000mmol/L。
5.根据权利要求4所述的一种核苷酸基金属仿生漆酶,其特征在于,所述盐包括NaCl,KCl,CaCl2,MgCl2。
6.根据权利要求1所述的一种核苷酸基金属仿生漆酶,其特征在于,还用于检测肾上腺素类化合物,所述肾上腺素类化合物选自肾上腺素和去甲肾上腺素。
7.根据权利要求6所述的一种核苷酸基金属仿生漆酶,其特征在于,所述检测肾上腺素类化合物的方法包括:将所述核苷酸基金属仿生漆酶与肾上腺素类化合物和缓冲液混合反应15-120min,溶液反应后离心,在485nm下测定上清液的吸光度。
8.根据权利要求7所述的一种核苷酸基金属仿生漆酶,其特征在于,所述核苷酸基金属仿生漆酶的浓度为0.025-0.5mg/ml,所述肾上腺素类化合物的浓度为0.005-0.1mg/mL,所述缓冲液为MES缓冲液,所述缓冲液的浓度为30-100mmol/L,所述缓冲液的pH为6.8-7.4。
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