[发明专利]细胞分离器具表面处理方法、相关器具、外周血稀有细胞或循环肿瘤细胞快速高效分离方法

说明书

本发明提供一种外周血稀有细胞快速高效分离方法，包括：(1)分离外周血中的白细胞，用细胞稀释液重悬浮白细胞得到白细胞溶液；(2)将磁球‑白细胞表面生物标志物抗体与白细胞溶液混合孵育获得孵育溶液；(3)将内壁采用纤维蛋白原封闭的环形管路的一部分置于磁场中，采用细胞稀释液稀释孵育溶液获得孵育稀释液，使孵育稀释液在环形管路中循环流动，通过磁场吸附孵育稀释液中的磁球，收集环形管路中的液体组分。还提供外周血循环肿瘤细胞快速高效分离方法、细胞分离器具表面处理方法和相关器具。本发明的外周血稀有细胞或循环肿瘤细胞分离方法能够快速高效地分离外周血稀有细胞或循环肿瘤细胞，设计巧妙，操作简便，适于大规模推广应用。

技术领域

本发明涉及细胞分离技术领域，特别涉及外周血稀有细胞或循环肿瘤细胞分离技术领域，具体是指一种细胞分离器具表面处理方法、相关器具、外周血稀有细胞或循环肿瘤细胞快速高效分离方法。

背景技术

外周血中的循环肿瘤细胞检测作为一种肿瘤液态活检重要内容具有极大的临床诊断价值。外周血中循环肿瘤细胞的检测面临的主要难点包括：1、循环肿瘤细胞数量极少，在7.5ml的血液样本中仅有数个到数十个；2、样本中比例极低，数个或数十个的细胞分布在5-7千万的正常细胞中；3、缺乏明确的循环肿瘤细胞的细胞表面标志物，目前较为广泛使用的循环肿瘤细胞的细胞表面标志分子为EpCAM，但越来越多的研究表明有相当数量的循环肿瘤细胞低表达或不表达该分子；4、缺乏明确的区别于正常细胞的物理特性。一些方法依据细胞密度或细胞大小进行循环肿瘤细胞的富集分离，这些方法都存在处理繁杂耗时、缺乏特性的缺陷。

目前的研究方向趋向于采用负向富集的方法，即将外周血样本中正常的细胞去除，得到外周血稀有细胞，其中最大限度地保留循环肿瘤细胞。外周血中正常细胞都表达CD45细胞表面分子，因此目前广泛采用的方法是采用表面包被特异性CD45抗体的磁球对正常细胞进行修饰，然后在磁场的作用下进行快速分离。但运用该方法往往不能得到预期的分离效果，原因包括：1、处理细胞过程中器具的与细胞接触的表面会非特异性吸附细胞，造成目标细胞10％-60％的损失，在运用一般的表面处理比如一定浓度的血清进行处理后，并不能有效改善；2、在加磁场进行分离时，由于磁场的作用距离较短，所以一般磁球对细胞的修饰会在一个较小的反应体系中进行，一般为小于1-5ml，这就造成样本中细胞的密度过大，达到1千万-7千万每ml，在加磁场分离的过程中，磁球修饰的细胞会大量携带非磁球修饰的细胞一起分离，导致目的细胞大量丢失。

一些采用微流体芯片的方法通过微流体的特性，将细胞的流动路径进行扰动，以增强细胞表面和流动管道内壁修饰的抗体接触，从而提高目标细胞的捕获效率；另一种微流体芯片采用微流体的特性或声波作用于流体的特性，将流体中不同粒径大小的细胞进行分层分离；无论哪种微流体芯片，其处理样品时采用的微流体处理样本的速度较慢，一般处理1ml的样本在2-3个小时以上。

因此，需要提供一种外周血稀有细胞或循环肿瘤细胞快速高效分离方法，其能够快速高效地分离外周血稀有细胞或循环肿瘤细胞。

发明内容

为了克服上述现有技术中的缺点，本发明的一个目的在于提供一种外周血稀有细胞快速高效分离方法，其能够快速高效地分离外周血稀有细胞，适于大规模推广应用。

本发明的另一目的在于提供一种外周血稀有细胞快速高效分离方法，其设计巧妙，操作简便，适于大规模推广应用。

本发明的另一目的在于提供一种外周血循环肿瘤细胞快速高效分离方法，其能够快速高效地分离外周血循环肿瘤细胞，适于大规模推广应用。

本发明的另一目的在于提供一种外周血循环肿瘤细胞快速高效分离方法，其设计巧妙，操作简便，适于大规模推广应用。

本发明的另一目的在于提供一种细胞分离器具表面处理方法，采用该方法进行表面处理的细胞分离器具可以有效减少细胞操作过程中对细胞的非特异性吸附，从而可以减少目标细胞的损失，提高目标细胞的富集分离效率，适于大规模推广应用。