[发明专利]一种夹心型乙型肝炎病毒标志物免疫传感器的构建方法及应用

说明书

本发明属于新型纳米复合材料、免疫分析和生物传感技术领域，本发明涉及一种夹心型乙型肝炎病毒标志物免疫传感器的构建方法及应用，基于吸附硫瑾的铂纳米线@SBA‑15微球复合材料构建的电化学免疫传感器，用于定量检测乙型肝炎病毒标志物，具有特异性强，灵敏度高，检测限低的优点，对乙型肝炎病毒感染的早期诊断具有重要的科学意义和应用价值。

技术领域

本发明属于新型纳米复合材料、免疫分析和生物传感技术领域，提供了一种夹心型乙型肝炎病毒标志物免疫传感器的构建方法，应用于乙型肝炎病毒标志物的检测。

背景技术

乙型肝炎病毒感染是全球最严重的健康问题之一，它可引发慢性肝炎、肝硬化等疾病，甚至引发位居全球癌症死亡率第二名的肝癌。血液中乙型肝炎病毒标记物的浓度是诊断乙型肝炎病毒感染的标准，乙型肝炎病毒标志物浓度的精确检测对乙型肝炎病毒感染的早期诊断具有重要意义。因此，发展高灵敏的乙型肝炎病毒标志物的定量检测方法尤为迫切。

近年来，随着临床诊断技术的飞速发展，性能优越的电化学免疫传感器脱颖而出，并被广泛应用于病毒标志物或肿瘤标志物的检测中。夹心型电化学免疫传感器是基于抗原和抗体特异性结合的一种分析方法，具有检测迅速、检出限低、灵敏度高、操作简单和制备成本低的优点，对痕量级病毒和肿瘤标志物的检测具有重要价值。

基底材料和催化剂材料作为电化学免疫传感器的重要组分，对提高免疫传感器的灵敏度具有重要作用。近年来，纳米材料及其复合材料被广泛应用于免疫传感器的构建当中。本发明利用层层自组装技术，以电沉积金薄膜和金纳米粒子构建的双金层为基底，以吸附硫瑾的铂纳米线@SBA-15微球作为检测抗体标记物构建一种夹心型乙型肝炎病毒标志物免疫传感器，具有检测范围广、检测下限低、操作简单、检测速度快等优点，对乙型肝炎的早期诊断具有重要的应用价值。

发明内容

本发明提供了一种夹心型乙型肝炎病毒标志物免疫传感器的构建方法及应用，实现了对乙型肝炎病毒标志物的超灵敏检测。

本发明的目的之一是提供一种夹心型乙型肝炎病毒标志物免疫传感器的构建方法。

本发明的目的之二是将所制备的一种夹心型乙型肝炎病毒标志物免疫传感器用于乙型肝炎病毒标志物的检测。

本发明的技术方案，包括以下步骤。

1. 一种夹心型乙型肝炎病毒标志物免疫传感器的构建方法，步骤如下：

（1）将直径为3.0 ~ 5.0 mm的玻碳电极用Al₂O₃抛光粉抛光成镜面，在无水乙醇中超声清洗干净；

（2）利用计时电流法，在-0.2 V下，将抛光好的玻碳电极置于5.0 mL、1.0 wt% ~2.0 wt%的氯金酸溶液中，电镀25 ~ 35 s，在电极表面形成电沉积金薄膜，用超纯水冲洗电极表面，室温下晾干；

（3）将上述电极浸入30 mL、1.0 mmol/L的4-氨基苯硫酚溶液，浸泡2.0 h，超纯水冲洗，室温下晾干；

（4）继续将电极浸入50 mL、0.04 ~ 0.05 mg/mL的金纳米粒子分散液，浸泡2.0 h，超纯水冲洗，室温下晾干；

（5）将6.0 µL、5.0 ~ 10.0 µg/mL的乙型肝炎病毒标志物捕获抗体Ab₁滴加到电极表面，4.0 °C冰箱中晾干；

（6）继续将3.0 µL、0.5 wt% ~ 1.0 wt%的牛血清蛋白溶液滴加到电极表面，用以封闭电极表面上非特异性活性位点，pH=7.0磷酸盐缓冲液冲洗电极，4.0 °C冰箱中晾干；

（7）继续滴加6.0 µL、0.00001 ~ 100 ng/mL的一系列不同浓度的乙型肝炎病毒标志物抗原溶液，4.0 °C冰箱中晾干；