[发明专利]一种夹心型乙型肝炎病毒标志物免疫传感器的构建方法及应用

权利要求书

1.一种夹心型乙型肝炎病毒标志物免疫传感器的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）将直径为3.0 ~ 5.0 mm的玻碳电极用Al₂O₃抛光粉抛光成镜面，在无水乙醇中超声清洗干净；

（2）利用计时电流法，在-0.2 V下，将抛光好的玻碳电极置于5.0 mL、1.0 wt% ~ 2.0wt%的氯金酸溶液中，电镀25 ~ 35 s，在电极表面形成电沉积金薄膜，用超纯水冲洗电极表面，室温下晾干；

（3）将上述电极表面浸入30 mL、1.0 mmol/L的4-氨基苯硫酚溶液，浸泡2.0 h，超纯水冲洗，室温下晾干；

（4）继续将电极浸入50 mL、0.04 ~ 0.05 mg/mL的金纳米粒子分散液，浸泡2.0 h，超纯水冲洗，室温下晾干；

（5）将6.0 µL、5.0 ~ 10.0 µg/mL的乙型肝炎病毒标志物捕获抗体Ab₁滴加到电极表面，4.0 °C冰箱中干燥；

（6）继续将3.0 µL、0.5 wt% ~ 1.0 wt%的牛血清蛋白溶液滴加到电极表面，用以封闭电极表面上非特异性活性位点，pH=7.0磷酸盐缓冲液冲洗电极表面，4.0 °C冰箱中晾干；

（7）继续滴加6.0 µL、0.00001 ~ 100 ng/mL的一系列不同浓度的乙型肝炎病毒标志物抗原溶液，4 °C冰箱中干燥；

（8）将6.0 µL、1.0 ~ 3.0 mg/mL的吸附硫瑾的铂纳米线@SBA-15微球/检测抗体Ab₂孵化物分散液滴涂于电极表面，置于4.0 °C冰箱中，静置40 min，用pH=7.0的磷酸盐缓冲液冲洗，4.0 °C冰箱中干燥，制得一种夹心型乙型肝炎病毒标志物免疫传感器。

2. 如权利要求1所述的一种夹心型乙型肝炎病毒标志物免疫传感器的构建方法，所述金纳米粒子分散液和吸附硫瑾的铂纳米线@SBA-15微球/检测抗体HBs-Ab₂孵化物分散液的制备，包括以下几个步骤：

（1）金纳米粒子分散液的制备

将1.0 ~ 2.0 mL、1.0 wt%的氯金酸溶液加入到99.0 mL超纯水中，加热至沸腾，加入1.5 ~ 3.5 mL、1.0 wt%的柠檬酸钠溶液，继续回流10 ~ 20 min，后冷却至室温，得到金纳米粒子分散液；

（2）吸附硫瑾的铂纳米线@SBA-15微球/检测抗体HBs-Ab₂孵化物分散液的制备

①铂纳米线@SBA-15微球的制备

取1.0 ~ 1.5 mL、12 wt%的氯亚铂酸钾溶液置于100 mL 烧杯中，置入0.4 ~ 0.6 g的SBA-15粉末，搅拌均匀，超声15 ~ 20 min后，置于25 °C真空干燥箱内干燥24 h，继续加入2.0 ~ 3.0 mL、1.0 mol/mL的抗坏血酸溶液后，置于25 °C真空干燥箱内还原1.0 h，继续加入5.0 ~ 7.0 mL、10 wt%的氢氟酸溶液，持续搅拌20 ~ 40 min后，离心，用超纯水洗涤，将所得到的固体置于30 °C真空干燥箱内干燥24 h，得到铂纳米线@SBA-15微球；

②吸附硫瑾的铂纳米线@SBA-15微球的制备

称取40 ~ 50 mg铂纳米线@SBA-15微球浸入到10 mL、1.0 ~ 1.5 mol/mL的硫瑾溶液中，超声分散，并在振荡器中持续振荡6.0 h后，离心，用超纯水洗涤，将所得到的固体置于30 °C真空干燥箱内干燥24 h，得到吸附硫瑾的铂纳米线@SBA-15微球；

③吸附硫瑾的铂纳米线@SBA-15微球/检测抗体HBs-Ab₂孵化物分散液的制备

取2.0 ~ 6.0 mg吸附硫瑾的铂纳米线@SBA-15微球分散到1.0 mL超纯水中，加入1.0 ~2.0 mL、20 ~ 30 μg/mL的乙型肝炎病毒标志物检测抗体Ab₂分散液，置于4.0 °C恒温振荡培养箱中振荡孵化6.0 ~ 8.0 h后，在5000 rpm转速下离心5.0 ~ 10.0 min，得到下层沉淀，加入1.0 mL、pH=7.0磷酸盐缓冲溶液离心洗涤1次，得下层沉淀，加入1.0 mL、pH=7.0磷酸盐缓冲溶液，分散均匀，得到吸附硫瑾的铂纳米线@SBA-15微球/检测抗体Ab₂孵化物分散液，在4.0 °C下保存。