[发明专利]一种提高西瓜未授粉子房胚状体诱导率方法

说明书

本发明提供了一种提高西瓜未授粉子房胚状体诱导率方法，该方法包括：在接种前，进行春季西瓜未授粉子房的选样和预处理；所述选样为选择留取全部果柄的西瓜未授粉子房；所述预处理的步骤为：（1）将选样所得未授粉子房置于浓度为0.02 mg/ml的TDZ中处理5‑10 min；（2）将步骤（1）所得物置于10℃下处理2 d，或置于15‑20℃下处理1‑2 d。本发明可以大幅度的提高春季西瓜未授粉子房胚状体的诱导率，最高可达15.9%，同时，所得胚状体的生长状况良好。

技术领域

本发明属于作物培育领域，具体涉及一种提高春季西瓜未授粉子房胚状体诱导率方法。

背景技术

西瓜(Citrullus lanatus)是葫芦科重要的蔬菜作物之一，具有丰富的营养和保健功能从而深受消费者喜爱，中国作为西瓜的生产和消费大国，其产量占世界总产量的60%以上，市场前景广阔。但是，我国西瓜育种水平相对滞后，品种类型无法完全满足市场需求，因此提高我国西瓜育种水平、增强西瓜产业国际竞争力具有重要意义。

单倍体植株进行加倍处理后获得双单倍体(DH)株系对于加速育种进程、创新种质资源、遗传图谱构建等方面均具有重要意义。人们尝试用多种方法获得单倍体，通常采用的有离体雄核培养和离体雌核培养，其中以花粉或花药为外植体的离体雄核培养研究较为深入，应用也更加普遍，特别是在十字花科和禾本科作物上。但是，在葫芦科作物上通过离体雄核培养来诱导单倍体的形成非常困难，直至目前还没有建立起较为成熟的诱导体系，因此研究较多的是以未授粉子房或胚珠为外植体的离体雌核培养。

离体雌核培养过程中再生植株的产生方式有两种，一种是诱导形成愈伤组织后再分化产生芽，最后形成完整再生植株；另一种是以胚状体发育途径直接形成再生植株。相关研究表明，愈伤组织途径形成的再生植株大部分起源于体细胞，而以胚状体发育途径产生的再生植株中单倍体植株的比例显著高于以愈伤组织途径形成的再生植株。这提醒我们在进行西瓜未授粉子房离体培养以创制单倍体植株的过程中，提高胚状体的诱导率是一个需要解决的关键问题。

虽然现有的研究可以将秋季西瓜未授粉子房胚状体的诱导率提高到20%左右，然而，对于春季西瓜未授粉子房胚状体，现有技术所获得的诱导率多在5 %以下，严重的限制了相关研究和产业的发展进程。

因此，以春季西瓜未授粉子房为研究对象进行探究，力争找到提高春季西瓜未授粉子房胚状体诱导率的方法，以期能够加速西瓜单倍体育种进程，为我国西瓜种质资源创新、新品种选育、基因工程相关研究提供帮助，是本领域亟待解决的问题。

发明内容

针对现有技术的缺点，本发明的目的在于提供一种提高春季西瓜未授粉子房胚状体诱导率方法，该方法包括：

在接种前，进行春季西瓜未授粉子房的选样和预处理；

所述选样为选择留取全部果柄的未授粉子房；

所述预处理的步骤为：

（1）将选样所得未授粉子房置于浓度为0.02 mg/ml的TDZ中处理5-10 min；

（2）将步骤（1）所得物置于10℃下处理2 d，或置于15-20℃下处理1-2 d。

所述西瓜未授粉子房为开花前一天的西瓜未授粉子房。

优选的，所述预处理步骤（1）的处理时间为10 min。

优选的，所述预处理步骤（2）为：将步骤（1）所得物置于10℃下处理2 d，或置于15℃下处理1-2 d，或置于20℃下处理1 d。更优选的，所述预处理步骤（2）为：将步骤（1）所得物置于15℃下处理2 d。

所述方法还包括：在接种前切除经过预处理的未授粉子房的外表皮，然后进行切片，切片厚度为1 mm，再进行消毒处理。优选的，所述消毒处理为：用3%的次氯酸钠溶液消毒2 min。