[发明专利]一种人体疲劳测定方法

说明书

技术领域

本发明涉及人体疲劳检测领域，涉及一种以唾液中出现的蛋白质为疲劳标志物判定疲劳的检测方法。

背景技术

疲劳又称疲乏，是主观上一种疲乏无力的不适感觉，客观上会失去其完成原来所从事的正常活动或工作的能力，按照形成的原因和发生机制可分为紧张性疲劳、运动性疲劳、情绪性疲劳、癌性疲劳及特定器官的疲劳，如肌肉疲劳、听觉疲劳、视觉疲劳等。疲劳的发生机制比较复杂，多数认为与多种感染，应激等引起的神经-内分泌-免疫网络功能紊乱的结果，另外近期研究进一步发现遗传、代谢等方面的因素也可能参与其中。

精神和躯体疲劳会导致操作人员由适任状态衰退成亚适任和不适任状态，类似醉酒后失去正常活动或工作的能力，对人的警觉、机敏、动作的协调、信息处理和决策都会产生负面影响，大量证据显示疲劳所致判断、决策和操作水平降低，导致了大量的职业伤害，比如：交通事故及医源性伤害。疲劳伤害是各国面临的重大公共卫生问题之一。虽然有些国家对于疲劳作业已经立法如：《欧洲工作时间法》，但因没有方便快捷的检测方法，立法执行困难。全球每年因疲劳导致的伤害占职业性伤害的21.7％，所致死亡占交通死亡的57％；我国每年因疲劳意外死亡约60万人；但迄今未建立类似酒驾检测的无创、便捷的疲劳检测技术。

发明内容

本发明需要解决的技术问题是提供一种非侵入式的用生物分子进行疲劳检测的方法。

为解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案是：

一种人体疲劳测定方法，通过测定核连蛋白-2确定是否疲劳及疲劳程度。

本发明技术方案的进一步改进在于：所述核连蛋白-2来自于体液。

本发明技术方案的进一步改进在于：所述体液为唾液。

本发明技术方案的进一步改进在于：唾液收集时要先用生理盐水漱口三次，再用清水漱口三次，然后收集唾液。

本发明技术方案的进一步改进在于：唾液收集量不小于0.1毫升。

本发明技术方案的进一步改进在于：唾液收集后需要储存时，需在-80～-70℃下储藏。

本发明技术方案的进一步改进在于：确定是否疲劳及疲劳程度的方法是检测唾液中核连蛋白-2含量，并根据是否含有核连蛋白-2及核连蛋白-2的含量多少确定是否疲劳及疲劳程度，核连蛋白-2的含量与疲劳程度成正相关关系。

本发明技术方案的进一步改进在于：当唾液中的核连蛋白-2大于0小于300ng/ml时，为轻度疲劳；当唾液中的核连蛋白-2大于300ng/ml时，为重度疲劳。

本发明技术方案的进一步改进在于：

A、收集唾液0.1～3毫升；

B、提取蛋白并测定含量

将唾液进行离心处理得到上清液Ⅰ，向上清液Ⅰ中滴入蛋白质提取剂后冷冻一段时间，得到冷冻液；

将冷冻液进行离心处理，取出下层液并再次冷冻，得到蛋白干粉；

将蛋白干粉溶于水化液中，并离心处理，得上清液Ⅱ并与NH₄HCO₃溶液混合，再次离心处理后向得到的上清液中加入胰酶并控温消化酶解，然后进行分子标记并测得核连蛋白-2的含量。

由于采用了上述技术方案，本发明取得的技术进步是：

本发明是通过测定人体的体液中特定蛋白质的有无或者含量的多少，进行疲劳检测，是一种非侵入式的生物分子检测方法，不会破坏人体组织，其具有无创、无痛、快速的优点。唾液作为体液之一，随时都可以方便地收集到，无创、无痛。其适用于人体，也可以延伸到动物体等。

将唾液中的蛋白作为临床标志物进行检测，可以用来协助疲劳诊断，甚至其他疾病的诊断。未来还可以如检测人体酒精含量(测酒驾)一样建立疲劳快速识别方法。对有效预防和减少因疲劳导致的生命和安全隐患，造福人民意义重大。

本发明利用了人体的唾液等体液成分，在飞行时间质谱检测时的2000～15000Da范围内可以获得良好的肽谱识别，并且多肽的检出与疲劳间呈现一定规律性。本发明建立人体疲劳和唾液标志物核连蛋白-2含量关系模型，为快速测定疲劳提供了理论依据；同时，本发明所利用唾液和其中疲劳时产生的核连蛋白-2等蛋白，具有易得性和易检测性，便于对疲劳进行测定。