[发明专利]一种基于发光量子点纳米微乳探针检测样品中角质蛋白19片段与癌胚抗原含量的试剂盒

权利要求书

1.一种检测样品中CYFRA 21-1与CEA含量的试剂盒，包括免疫层析检测试纸条和功能性量子点纳米微乳探针；其特征在于，所述功能性量子点纳米微乳探针的制备方法如下：将发射波长在520～620 nm之间的油溶性量子点镶嵌或包裹入羧基、氨基、羟基、醛基或磺酸基修饰的聚苯乙烯纳米微球，制备得到发光量子点纳米乳胶微球；将发光量子点纳米乳胶微球分别与CYFRA 21-1检测单抗、CEA检测单抗、质控检测抗体共价连接，并对其表面非特异处理，分别得到抗CYFRA 21-1 量子点探针、抗CEA 量子点探针、质控量子点探针；所述免疫层析检测试纸条的检测线上分别包被CYFRA 21-1包被单抗、CEA包被单抗，质控线上包被质控包被抗体。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述520～620 nm之间的油溶性量子点为520～620 nm之间的硒化镉、硫化镉或碲化镉为核的半导体纳米晶体。

3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述羧基、氨基、羟基、醛基或磺酸基修饰的纳米乳胶微球为聚苯乙烯-二乙烯基苯羧酸改性胶乳。

4.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述发光量子点纳米乳胶微球的具体制备方法为：取溶解于正己烷浓度为1～5 μM的量子点加入甲醇中，震荡后离心、去除上清液；然后加入三氯甲烷溶解沉淀得量子点溶液，其中溶解于正己烷浓度为1～5 μM的量子点：甲醇：三氯甲烷的体积比为2:20:1～2；取胶乳纳米微球加入到相当于微球8～9倍体积的正丁醇中，制得纳米微球悬液；将纳米微球悬液与量子点溶液按照10:1～4.5:1的体积比混合，室温孵育，离心、洗涤数次后得到发光量子点纳米乳胶微球。

5.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，发光量子点纳米乳胶微球与抗体的连接方法为：

(1)量子点纳米乳胶微球用MES溶液离心、洗涤2～3次，洗涤后的量子点纳米乳胶微球用MES溶液配置成2～3mg/mL的量子点纳米乳胶微球溶液；

(2)往上述量子点纳米乳胶微球溶液中分别加入溶于MES溶液、浓度为10～15mg/mL的Sulfo-NHS溶液和溶于MES溶液、浓度为10～15mg/mL的EDAC溶液，室温震荡孵育得混合液A，点纳米乳胶微球溶液、Sulfo-NHS溶液、EDAC溶液的体积比为40:9:1；

(3)将准备用于偶联的抗体溶于MES溶液中得到浓度为1～2mg/mL抗体溶液；

(4)向混合液A中加入步骤(3)制得的抗体溶液，室温下震荡孵育即得，混合液A与抗体溶液的体积比为4～6:1。

6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，步骤（1）、（2、（3）中所述MES溶液均为50mM，pH 5.0的MES溶液。

7.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，步骤（1）中配置成2.5mg/mL的量子点纳米乳胶微球溶液。

8.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，步骤（1）中Sulfo-NHS溶液和EDAC溶液的浓度均为10mg/mL。

9.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，抗体溶液的浓度为1mg/mL，混合液A与抗体溶液的体积比为5:1。