[发明专利]铅暴露工人岗前入职筛选微小RNA标志物及其应用

说明书

铅暴露工人岗前入职筛选微小RNA标志物，检测铅暴露工人的血清/血浆微小RNA标志物，所述生物标志物为：miR‑520c‑3p、miR‑211、miR‑148a、miR‑572；其中miR‑211序列UUCCCUUUGUCAUCCUUCGCCU。微小RNA标志物在制备检测的试剂盒中应用，试剂盒通过检测铅耐受者的miR‑211含量，并与铅易感者水平相比较来进行铅暴露工人岗前筛查；miR‑211PCR扩增法RT引物及扩增引物；作为筛选出铅暴露工人岗前筛查血清/血浆miRNA标志物，操作简单，灵敏度高，适用于大规模易感人群筛查，为铅暴露工人岗前入职筛选提供依据。

技术领域

本发明属于生物技术学领域，涉及血清/血浆微小RNA(microRNA，简称miRNA)的应用，公开了一种用于铅暴露工人岗前入职筛选的血清/血浆miRNA及其应用。

背景技术

铅因其在环境中不可降解而普遍存在，可通过消化道、呼吸道等途径进入机体影响神经、消化、造血等多个系统的功能，造成机体损害。铅所致的神经发育毒性无阈值，有研究报道即使血铅水平低于100μg/L仍然存在神经发育毒性(Akesson,A et al 2005)。因此，寻找铅中毒易感者标志物有助于及早发现铅中毒易感人群。在既往研究中，多种miRNAs被证实出现了差异性表达，并参与了铅中毒的过程中。

随着经济的发展，铅引发的职业健康问题也引起了相关政府部门的密切关注。国家职业安全与健康研究所(NIOSH)的一份报告估计，美国有大约300多万工人在工作时可能接触铅。2014年，中国疾病控制中心报告了224起慢性铅中毒职业病例，血铅浓度超过600μg/dl(BLLs)。工业铅中毒的主要暴露源包括电池循环，铅汽油工业，轴承臂工作，管道制造，造船，颜料和印刷。此外，靠近铅相关工业厂房的农田也容易受到污水污染，特别是在下游地区。

有毒金属通常与人体中表观遗传学的修饰密切相关，包括DNA甲基化，组蛋白乙酰化和miRNA失调。这些表观遗传变化也可能通过其特殊机制影响基因的表达。作为表观遗传学的一个重要组成部分。微小RNA(microRNA，miRNA)是一类长约20～25个核苷酸的非编码RNA，它参与细胞的靶mRNA的3’端非翻译区序列完全或部分互补结合，导致靶mRNA降解或转录后翻译抑制，从而调控靶基因的表达。

研究发现，血清/血浆miRNA非常稳定，反复冻融、酸碱环境、煮沸、长期保存等均不会造成血清/血浆miRNA的损失，而且miRNA在外周血中的表达同样具有组织的相关性和特异性。循环miRNA检测损伤性小、灵敏度高、可重复性好、费用低，已有很多关于血清/血浆miRNA用于肿瘤早期检测和预后生物标志物的(Avila-Moreno et al.2011；Qu etal.2011；Cortez et al.2012)，但其作为铅暴露工人入职筛选还是首创。在这项研究中，我们通过调查铅耐受型工人血清/血浆及年龄性别匹配的铅易感型工人血清/血浆中筛选出差异表达的miRNAs，然后找出血清/血浆中共同上调或下调的miRNAs，作为铅暴露工人岗前筛查血清/血浆miRNA标志物，为铅暴露工人岗前入职筛选提供依据。

发明内容

本发明目的，首次将铅耐受型工人血清/血浆与年龄性别等匹配的铅易感型工人血清/血浆筛选出差异表达的miRNAs，然后找出血清/血浆中相对上调(明显增加)或下调(明显降低)的miRNAs，再通过与入职前铅耐受型工人和铅易感型工人血清/血浆中miRNAs做对比，找出入职前相同差异改变的miRNA，作为筛选出铅暴露工人岗前筛查血清/血浆miRNA标志物，为铅暴露工人岗前入职筛选提供依据。

本发明技术方案：铅暴露工人岗前入职筛选微小RNA标志物，即检测铅暴露工人的血清/血浆微小RNA标志物，所述生物标志物为：miR-520c-3p、miR-211、miR-148a、miR-572。

其中miR-211序列UUCCCUUUGUCAUCCUUCGCCU。

所述铅暴露工人岗前入职筛选微小RNA标志物在制备检测的试剂盒中应用。