[发明专利]一种同时检测脂肪酰中性氨基酸表面活性剂中脂肪酸与活性物含量的方法

权利要求书

1.一种同时检测脂肪酰中性氨基酸表面活性剂中脂肪酸与活性物含量的方法，其特征在于：包括如下步骤：

(1)配制脂肪酸标准溶液

配制不同浓度的脂肪酸标准溶液，其中溶剂为丙酮，溶质包括辛酸、癸酸、月桂酸、肉豆蔻酸、软脂酸和硬脂酸；

(2)配制活性物标准溶液

配制不同浓度的活性物标准溶液，其中溶剂为丙酮，溶质包括辛酰氨基酸、癸酰氨基酸、月桂酰氨基酸、肉豆蔻酰氨基酸、软脂酰氨基酸和硬脂酰氨基酸；

(3)制备待测溶液

准确称取脂肪酰中性氨基酸表面活性剂于容量瓶中，加入体积浓度为80-85％的丙酮水溶液，然后加入无机酸，定容，得预处理液；

将所述预处理液经C18柱吸附，然后用体积浓度为18-22％的乙腈水溶液洗涤，再真空抽干乙腈水溶液；

用丙酮洗脱吸附后的所述C18柱，收集洗脱液，得所述待测溶液；

(4)衍生化

准确移取所述脂肪酸标准溶液、所述活性物标准溶液或所述待测溶液于碘量瓶中，加入衍生化试剂溶液和催化剂溶液，于88-92℃下回流20-40min，再加入乙酸溶液继续回流20-40min，冷却后用氮气吹干，用丙酮定容，得脂肪酸标准溶液衍生化样品、活性物标准溶液衍生化样品或待测溶液衍生化样品；

所述衍生化试剂溶液的摩尔浓度为0.04-0.06M，其中衍生化试剂选自2-溴代苯乙酮、2,4’-二溴苯乙酮、2-溴-4’-甲氧基苯乙酮或2-溴代苯丙酮，其中溶剂为乙腈；每ml所述标准溶液或每ml所述待测溶液加入2-4ml所述衍生化试剂溶液；

所述催化剂溶液的摩尔浓度为0.4-0.6M，其中催化剂选自三乙胺、吡啶、2,6-二甲基吡啶或4-(二甲氨基)吡啶，每ml所述标准溶液或每ml所述待测溶液加入4-6ml所述催化剂溶液；

(5)测定

精确吸取所述脂肪酸标准溶液衍生化样品，采用HPLC进行测定，根据检测结果绘制脂肪酸标准曲线；

精确吸取所述活性物标准溶液衍生化样品，采用HPLC进行测定，根据检测结果绘制活性物标准曲线；

所述HPLC的色谱条件如下：

色谱柱：C18柱；柱温25-35℃；检测波长244±5nm；

流动相A：体积比为0.1％的甲酸水溶液；

流动相B：体积比为55:45的甲醇/乙腈混合溶液，其中含有体积比为0.05％的甲酸；

梯度洗脱程序：0-15min，流动相A的体积百分含量由35±3％减至20±3％；15-20min，流动相A的体积百分含量保持20±3％；20-40min，流动相A的体积百分含量由20±3％减至0％；40-45min，流动相A的体积百分含量保持0％；45-50min，流动相A的体积百分含量增至35±3％；流速为0.8-1.2ml/min；

精确吸取所述待测溶液衍生化样品，采用HPLC进行测定，根据检测结果以及所述脂肪酸标准曲线和所述活性物标准曲线计算样品中的脂肪酸与活性物含量。

2.根据权利要求1所述的同时检测脂肪酰中性氨基酸表面活性剂中脂肪酸与活性物含量的方法，其特征在于，所述脂肪酰中性氨基酸表面活性剂选自：脂肪酰肌氨酸、脂肪酰肌氨酸盐、脂肪酰甘氨酸、脂肪酰甘氨酸盐、脂肪酰丙氨酸或脂肪酰丙氨酸盐。

3.根据权利要求1所述的同时检测脂肪酰中性氨基酸表面活性剂中脂肪酸与活性物含量的方法，其特征在于，步骤(1)中所述脂肪酸标准溶液中辛酸、癸酸、月桂酸、肉豆蔻酸、软脂酸和硬脂酸的浓度均分别为5-500mg/L。

4.根据权利要求1所述的同时检测脂肪酰中性氨基酸表面活性剂中脂肪酸与活性物含量的方法，其特征在于，步骤(2)中所述活性物标准溶液中辛酰氨基酸、癸酰氨基酸、月桂酰氨基酸、肉豆蔻酰氨基酸、软脂酰氨基酸和硬脂酰氨基酸的浓度均分别为5-500mg/L。

5.根据权利要求1所述的同时检测脂肪酰中性氨基酸表面活性剂中脂肪酸与活性物含量的方法，其特征在于，步骤(3)中所述无机酸选自盐酸、硫酸、磷酸及硝酸。

6.根据权利要求1所述的同时检测脂肪酰中性氨基酸表面活性剂中脂肪酸与活性物含量的方法，其特征在于，所述乙酸溶液的摩尔浓度为0.6-0.7M。