[发明专利]一种重组美洲大蠊胸腺素蛋白PaTHY2及其表达方法在审
| 申请号： | 201611137930.7 | 申请日： | 2016-12-09 |
| 公开（公告）号： | CN107722119A | 公开（公告）日： | 2018-02-23 |
| 发明（设计）人： | 耿福能;岳碧松;沈咏梅 | 申请（专利权）人： | 四川好医生攀西药业有限责任公司 |
| 主分类号： | C07K14/575 | 分类号： | C07K14/575;C12N15/70;C12R1/19 |
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| 地址： | 610031 四*** | 国省代码： | 四川;51 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 重组 美洲 胸腺 蛋白 pathy2 及其 表达 方法 | ||
1.一种重组美洲大蠊胸腺素蛋白PaTHY2，其特征在于，所述胸腺素蛋白PaTHY2的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。
2.权利要求1所述胸腺素蛋白PaTHY2的表达方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)从美洲大蠊组织提取RNA，反转录为cDNA；
(2)合成引物：
Primer F CGCGAATTCATGTCGGCCCCAGTC
Primer R CCGCTCGAGTTATGCTTTCTTCTCTTCATCG
(3)以总cDNA为模板，通过PCR获得美洲大蠊胸腺素蛋白编码基因片段；
(4)将编码基因克隆入原核表达载体中，转化宿主菌，培养所得重组工程菌，然后诱导其表达目的蛋白；
(5)采用亲和层析方法对目的蛋白进行纯化，从而获得重组美洲大蠊胸腺素蛋白PaTHY2。
3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤(3)所述的美洲大蠊胸腺素蛋白编码基因片段的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示。
4.如权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤(3)所述PCR反应条件为94℃，预变性4min，94℃变性30s，60℃退火50s，72℃延伸20s-30s，35次循环，最后72℃延伸10min。
5.如权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤(4)所述表达载体为PET-28a。
6.如权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤(4)所述宿主菌为大肠杆菌BL21。
7.如权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤(4)所述诱导的诱导剂是IPTG，浓度为0.5mmol/L，诱导温度为37℃，诱导时间为6h。
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