[发明专利]一种人正常角膜上皮细胞及其用途

说明书

本发明公开了一种人正常角膜上皮细胞及其用途。该细胞命名为人正常角膜上皮细胞HNCEC/HL‑008，保藏编号为CCTCC NO：C201550。所述细胞株是从胬肉患者手术切除的胬肉旁正常角膜缘组织样品中制备所得，经核型分析鉴定为人的正常二倍体细胞，显微镜下观察细胞的形态为排列紧密、细胞界限清晰、立体感强、多角型的上皮细胞，这种均一的细胞形态一直保持到65天，而且仍能处于增殖状态正常生长，在三维的培养条件下具有正常的分化功能。这种人正常角膜上皮细胞可用于人正常细胞的生理学研究，体外正常细胞的药物毒性研究和检测，角膜和角膜相关疾病包括病毒性角膜炎的发病机理研究。

技术领域

本发明属于细胞生物学领域，涉及一种人正常角膜上皮细胞及其用途。

背景技术

人体重要器官如肺、肾、肝、胰腺和皮肤都由器官特异性分化的上皮细胞为其组成成分。这些特异性分化的上皮细胞与不同器官的特异性功能直接相关，如肺的气体交换功能、肾的过滤功能、肝的解毒及中和功能、胰腺细胞产生胰岛素、皮肤具有保护机体免受外界环境的伤害。而这些重要器官一旦发生病变或退化就会威胁人类的健康，因为这些重要器官是很难被替换的，不同器官的特异性细胞也不能相互取代其它器官的细胞。这些特异性分化的细胞都是很难再生的，更不要说在体外进行培养增殖了。

这样大大限制了人们对机体正常细胞功能的认识，很多来自于科技文献甚至教科书的细胞生物学知识的描述是不准确甚至是错误的。真正的原因是多数正常细胞的生物学知识来源于体外培养的细胞系研究结果。尽管各国科学家始终不断的尝试着培养和增殖人体重要器官的功能性的上皮细胞，但是，对于分离自人和哺乳动物的原代上皮细胞的体外培养仍然是很困难的。应用目前的无血清培养基，有的只能进行短期的原代培养(存活数天，如肺和胰腺等上皮细胞)，有的只能进行有限的传代培养(1-3代，如气管/角膜及前列腺等上皮细胞)，有的甚至根本不能体外培养(如肝、结肠、前列腺等上皮细胞)，只有来自于人体皮肤的角化上皮细胞可以传代培养10代左右。而且从每个动物或活体组织样品中获得的上皮细胞产量仍然很低，包括细胞的数量、直接分离或短期培养的细胞纯度都是很低的，这些原代和传代上皮细胞的增殖速度也极为有限。

为了在体外进行上皮细胞的培养，目前国外尝试通过遗传操作，如转入病毒(SV40T或HPV16E6E7)或细胞癌基因，可以延长体外细胞存活的代数。然而遗传操作的最大缺点是会改变这些细胞的遗传背景和表型，以致让这些正常上皮细胞丢失其正常生理功能，如p53和pRB信号通路常常被抑制。而且，这些经遗传修饰的细胞是不可能重新再移植进机体的。但是由于目前缺乏有效的体外培养上皮细胞的技术，上述这些细胞在当今世界的医学和生命科学研究中仍然备受青睐。在非癌症研究领域，它们就代表着最初来源的“功能”性的组织或器官。现阶段，国内外还从未有过“正常细胞”可以应用于基础和临床医学研究。

正常人角膜上皮细胞主要功能：(1)角膜表面的上皮细胞构成了非角化的复层上皮(2)能分泌黏蛋白组成物理屏障，可有效防止多种物理和化学损伤。(3)产生和分泌化学介质和细胞因子形成高度复杂的宿主防御系统。人角膜上皮细胞与主要病理生理疾病有关，如角膜损伤、病毒性角膜炎。如果能获得体外稳定传代的人正常角膜上皮细胞，将使人们可以更全面地研究角膜上皮细胞的正常功能，角膜疾病发病机理，组织器官功能重建或再造，以及测定药物对正常细胞的毒性，这些都将对基础和临床医学研究与应用有重大意义。

发明内容