[发明专利]一种油佐剂疫苗的精确定性定量检测方法

权利要求书

1.一种油佐剂疫苗的精确定性定量检测方法，其特征在于，包括以下步骤：将油佐剂疫苗破乳，将破乳后的抗原样品进行定量分析，同时采用凝胶电泳的手段进行纯化，然后将纯化后的抗原样品进行定性检测；

所述破乳方法为：将油佐剂疫苗与破乳剂混合，分层后得水相抗原样品，再进行真空冷冻干燥或浓缩，即得抗原样品；所述破乳剂包括有机溶剂与酸的混合物，所述有机溶剂选自乙腈、正丁醇、苯甲醇、丁基二乙二醇、乙醇中的一种，所述酸选自盐酸、乙酸、甲酸、三氟乙酸中的一种；

所述破乳剂中酸与有机溶剂的体积比为0.05：100或0.33:100；

油佐剂疫苗与破乳剂按体积比9:1～5:5进行混合。

2.根据权利要求1所述的油佐剂疫苗的精确定性定量检测方法，其特征在于，破乳剂中有机溶剂选自乙腈、乙醇中的一种，酸选自三氟乙酸、盐酸中的一种。

3.根据权利要求1所述的油佐剂疫苗的精确定性定量检测方法，其特征在于，所述采用凝胶电泳的手段进行纯化的具体步骤为：

S1、将抗原样品进行凝胶电泳，然后进行染色确定目标蛋白条带；

S2、将含目标蛋白的凝胶切成1～2mm³大小的胶块进行脱色处理，然后进行样品处理；

S3、经处理后的胶块再进行超声萃取，所得上清液进行真空冷冻干燥或浓缩，即可。

4.根据权利要求1所述的油佐剂疫苗的精确定性定量检测方法，其特征在于，所述采用凝胶电泳的手段进行纯化的具体步骤为：

S1、将抗原样品进行凝胶电泳，然后取其中一个泳道的凝胶进行染色确定目标蛋白条带位置；

S2、将未染色凝胶上与染色的凝胶上目标蛋白条带位置相同的凝胶切成1～2mm³大小的胶块进行样品处理；

S3、经处理后的胶块再进行超声萃取，所得上清液进行真空冷冻干燥或浓缩，即可。

5.根据权利要求3或4所述的油佐剂疫苗的精确定性定量检测方法，其特征在于，步骤S1中，所述凝胶电泳采用的条件为：采用丙烯酰胺质量含量为5％的浓缩胶和丙烯酰胺质量含量为12％分离胶，210V电压下处理30-40min。

6.根据权利要求3或4所述的油佐剂疫苗的精确定性定量检测方法，其特征在于，步骤S2中，所述样品处理具体包括以下步骤：

A1、将含目标蛋白的胶块经ddH₂O清洗、乙腈震荡脱水后，加入含二硫苏糖醇的NH₄HCO₃水溶液进行第一次孵育；

A2、经第一次孵育后的胶块用乙腈震荡脱水后，再加入含碘乙酰胺的NH₄HCO₃水溶液进行第二次孵育；

A3、经第二次孵育后的胶块用乙腈震荡脱水后，加入含胰蛋白酶的NH₄HCO₃水溶液进行第三次孵育；

所述第一次孵育条件为：56℃下孵育30min；第二次孵育条件为：RT避光孵育20min；第三次孵育条件为：56℃下孵育3h。

7.根据权利要求1所述的油佐剂疫苗的精确定性定量检测方法，其特征在于，所述定量分析采用HPLC检测。

8.根据权利要求1所述的油佐剂疫苗的精确定性定量检测方法，其特征在于，所述定性分析采用LC/MS检测。