[发明专利]一种铁线莲的高效离体快繁方法及其培养基

说明书

本发明公开了一种铁线莲的高效离体快繁方法及其培养基，使用该方法及其培养基可快速繁殖生产大量的铁线莲优质种苗，而且这种种苗的发生不受季节限制，可以常年生产，再生植株表型一致性高，可以以此再生系统作为转基因的受体系统进一步制备转基因植株，使之既能保持亲本的遗传表型，又具有所转入的外源目的基因的性状。

技术领域

本发明涉及铁线莲的繁殖方法，尤其是一种铁线莲的高效离体快繁方法及其培养基。

背景技术

铁线莲是毛茛科(Ranunculaceae)铁线莲属(Clematis L.)植物的总称，为多年生木质或草质藤本。铁线莲是良好的观赏植物，品种丰富、花色艳丽、花期较长、枝蔓健壮，适生能力强，攀爬特性好，享有“藤本皇后”的美誉。铁线莲又是传统的药用植物，根或全草入药，富含黄酮、香豆素及酚酸化合物类等多种有效成分，具有破痞，调温，止腐、消肿，止泻及防癌抗癌之功效，为传统的中草药及民族中药(蒙药、畲药等)的骨干药材。铁线莲多为良好的旱生沙生植物，我国内蒙、甘肃、宁夏等省份铁线莲较为品种丰富、抗病性强、适应性强，为沙漠与戈壁治理性经济物种的上好选择。

铁线莲世界广布，主要分布于北半球热带和亚热带，少数在温带和寒带。根据世界植物名录(The Plant List)记载，目前接受374种，另有80余个变种或变型。我国该属植物资源最丰，全国均产，有147种，其中96种特有。我国早在17世纪已有重瓣品种记载，后传入日本和欧洲；18、19世纪，多种铁线莲被引入欧洲；19世纪末，在欧洲，通过育种产生了大量的大花品种，形成众多品种群。此后，小花、束花、黄色花和鲜红色花品种逐步引起人们重视。历经数百年的栽培育种，已培育出种不同花色、不同花型、不同开花季节的园艺品种。至2012年国际铁线莲协会(International Clematis Society)标准登录品种约500个，但商业品种记录已有近3600个。

然而，铁线莲结实少、萌发时间长、种子萌发率低，而组织培养再生系统具有繁殖系数高、周期短 、遗传稳定性高、成本很低可以大规模应用等优点，建立铁线莲组培工厂化育苗体系显得尤为重要。

发明内容

为尽快实现铁线莲大规模种植并合理利用其生态功能，我们对铁线莲的离体快繁进行了研究，获得了较高频率的再生植株。

本发明首先提供了一种用于铁线莲离体快繁的培养基(TXL)，其组成成分如下表所示：

pH 5.8±0.1。

优选地，所述TXL培养基的灭菌方法为：121℃灭菌15-25分钟。

其次，本发明提供了铁线莲的离体快繁方法，所述方法包括步骤：

1)取材：铁线莲新抽出的枝条或花芽；

2)消毒：将枝条或花芽洗净，吸干表面水珠，用65-75％乙醇消毒1-2分钟，0.1％升汞浸泡8-20分钟，无菌水冲洗5-10次，吸干表面水珠后将茎秆去掉，保留茎节，切成长度1±0.5厘米的茎段；

3)将步骤2)所得的茎节的切段接种于含有1mg/L BA和0.1mg/L NAA的TXL 培养基上培养20-30天后，茎节处开始抽出新的腋芽，在此培养基上继续培养4-6周后，新抽出的腋芽伸长并开始重新分节；

4)将步骤3)所得的伸长的腋芽切下，重新切成长度为0.5-1厘米的含有茎节的切段，在附含1－3mg/L NAA和0.1－0.5mg/L TDZ的TXL培养基上培养4-6周，再转接至附含0.5－3mg/L BA和0.1－0.5mg/L NAA的TXL培养基上培养4-6周后，茎节处开始有大量的不定芽丛生，4周继代一次，培养基不变；