[发明专利]一种铁线莲的高效离体快繁方法及其培养基

权利要求书

1.一种用于铁线莲离体快繁的培养基TXL，其特征在于其组成成分如下表所示：

pH 5.8±0.1；所述铁线莲为铁线莲属铁线莲种的植株。

2.一种铁线莲的离体快繁方法，其特征在于包括步骤：

1)取材：铁线莲新抽出的枝条或花芽；

2)消毒：将枝条或花芽洗净，吸干表面水珠，用65-75％乙醇消毒1-2分钟，0.1％升汞浸泡8-20分钟，无菌水冲洗5-10次，吸干表面水珠后将茎秆去掉，保留茎节，切成长度1±0.5厘米的茎段；

3)将步骤2)所得的茎节的切段接种于组成为1mg/L BA和0.1mg/L NAA的TXL培养基上培养20-30天后，茎节处开始抽出新的腋芽，在此培养基上继续培养4-6周后，新抽出的腋芽伸长并开始重新分节；

4)将步骤3)所得的伸长的腋芽切下，重新切成长度为0.5-1厘米的茎节的切段，在组成为1－3mg/L NAA和0.1－0.5mg/L TDZ的TXL培养基上培养4-6周，再转接至组成为0.5－3mg/L BA和0.1－0.5mg/L NAA的TXL培养基上培养4-6周后，茎节处开始有大量的不定芽丛生，4周继代一次，培养基不变；

5)将步骤4)所得的不定芽培养物分割成3-4块愈伤组织和芽的混合块，不定芽的茎段在组成为0.5－3mg/L BA、0.1－0.5mg/L NAA和0.1-1mg/L GA的TXL培养基上培养3-4周后，不定芽并且不定芽明显伸长分节；

6)将伸长后的芽苗分离成单株，用组成为5mg/L IBA的TXL培养基预培养3-5天，切除形态学下端1毫米茎段后，转入组成为0.1－0.5mg/L IBA、蔗糖2％，0.25％gelrite的1/2MS培养基中培养4-6周后不定根被诱导出来；

7)将步骤6)所得生根苗进行耐受培养1-2周后，打开培养瓶盖子，注入10-20mL无菌水或去离子水，炼苗5-8天；

8)将生根小苗移栽到泥炭、菜园土和珍珠岩的基质中，在28±2℃、自然光照的大棚中生长良好，成为与自然生长小苗一致的铁线莲再生植株；

其中，所述TXL培养基为权利要求1所述的培养基。

3.如权利要求2所述的铁线莲的离体快繁方法，其特征在于步骤3)-5)中的培养条件为光照60μmol.m^-2.s^-1，16h/d，培养温度为25±2℃。

4.如权利要求2所述的铁线莲的离体快繁方法，其特征在于步骤6)中的培养条件为光照80μmol.m^-2.s^-1，16h/d，培养温度24±1℃。

5.如权利要求2所述的铁线莲的离体快繁方法，其特征在于步骤7)的耐受培养条件为光照80μmol.m^-2.s^-1，16h/d，培养温度28±2℃。

6.如权利要求2所述的铁线莲的离体快繁方法，其特征在于步骤8)中泥炭、菜园土和珍珠岩的质量比为3∶6∶1。

7.如权利要求2-6任一项所述的离体快繁方法在转基因植株制备和细胞杂交中的应用。

8.如权利要求1所述的培养基TXL在铁线莲植株和转基因植株制备和细胞杂交中的应用。